同时检测多基因DNA甲基化的方法及其应用

摘要

本发明涉及同时检测多基因DNA甲基化的方法及其应用，本发明的同时检测多基因甲基化水平的方法，为先用亚硫酸盐法处理待测的DNA，再将处理的DNA变性后，与连接探针杂交，而后在DNA连接酶的作用下发生连接反应，再利用通用引物进行PCR扩增后，与交联了各种反条码杂交探针的荧光编码微球混合经液态芯片平台读取分析数据。本发明还进一步公开了利用上述方法设计的试剂盒。本发明的多基因DNA甲基化的方法可用于高通量检测DNA甲基化。

主权项

一种同时检测多基因甲基化水平的方法，包括下列步骤：1)用亚硫酸盐法处理待检测的DNA，使其含有的所有的未甲基化的胞嘧啶都转变为尿嘧啶；2)将多种待测DNA的连接探针在同一个反应体系里与经第1)步处理后的DNA混合后，先进行DNA变性反应，再进行DNA与探针的杂交反应，而后在DNA连接酶的作用下发生连接反应；3)以步骤2)获得的连接产物为模板，使用通用引物进行PCR扩增，其中通用引物中的反向引物5’端均标记了生物素；4)将步骤3)获得的PCR扩增产物与交联了各种反条码杂交探针的荧光编码微球混合，先高温变性后退火杂交，然后加入亲和素-藻红蛋白(SA-PE)孵育，最后使用Luminex100或Luminex 200等液态芯片平台进行读取分析。