从林蛙油中提取多糖的方法

摘要

本发明公开了从林蛙油中提取多糖的方法，通过林蛙油用水发制、Co60辐照、乙醇醇沉、有机脱肽液脱多肽和DEAE层析柱层析纯化；这样有利于多糖的提取，有利于多糖与蛋白质之间连接断开，有利于肽段与多糖的分离，有利于提高多糖的纯度，且提取过程对多糖的生物活性影响较少，多糖提取率可以达到34％，多糖的纯度可以达到98.26％；因此本发明是一种多糖提取率较高，提取的多糖纯度较高、生物活性较好的从林蛙油中提取多糖的方法。

主权项

从林蛙油中提取多糖的方法，其特征在于包括下述步骤：1)发制：在每克林蛙油中加入100～150ml去离子水，搅拌后在40～55℃温度条件下发制9～12小时，得到发制液；2)辐照：将上述发制液装入塑料袋中并封口，然后用照射剂量为10～15Kgy的Co60辐照该塑料袋，得到辐照液；3)醇沉：按体积比2∶1在上述辐照液中加入浓度为95％的乙醇醇沉，离心过滤得到沉淀物；4)脱肽：按重量比1∶50在上述沉淀物中加水溶解配成水溶液，按体积比4∶1比例由氯仿和正丁醇配成有机脱肽液，脱多肽方法为按体积比5∶2在所述水溶液中加入所述有机脱肽液，振荡20～40min，静置让水溶液与有机脱肽液分层，取上层的水溶液重复上述用有机脱肽液脱多肽方法，脱多肽4～5次后脱肽完毕，最后取得上层的水溶液为多糖溶液；5)纯化：将上述多糖溶液用二乙氨乙基纤维素(DEAE)-52层析柱层析，层析后用水、0.1mol/LNaCl溶液、0.3mol/L的NaCl溶液依次梯度洗脱，混合各次洗脱液，洗脱液减压浓缩后用去离子水透析36小时除去洗脱液中NaCl，然后真空干燥洗脱液得到多糖。