一种蛋白质双向电泳方法

摘要

本发明提供了一种蛋白质双向电泳方法。该方法首先用盐酸胍溶液溶解新鲜制备或冻存的蛋白干粉，再加入终浓度分别为2-5mM的三丁基膦和50-100mM的2-乙烯基吡啶以还原并烷基化蛋白；避光静置反应60-120分钟后加入5-10倍体积-20℃预冷的无水乙醇沉淀蛋白；再用乙醇洗除盐分，晾干或冻干后即得烷基化蛋白。烷基化蛋白用于双向电泳分析时，等电聚焦上样缓冲液中可不加还原剂，胶条的平衡也可简化为一步，同时平衡液中也无需再添加还原剂和/或烷基化试剂。本发明可提高蛋白质的溶解性，以及在电泳过程中的稳定性，简化双向电泳的操作步骤进而减少蛋白的损失。能广泛用于蛋白质组学领域。

主权项

一种蛋白质双向电泳方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)用6M盐酸胍溶解蛋白干粉，至蛋白浓度为10-30mg/ml；依次加入终浓度分别为2-5mM和50-100mM的三丁基膦和2-乙烯基吡啶，避光静置反应60-120分钟；(2)4℃、10,000g离心，取上清加入3-10倍体积-20℃预冷的无水乙醇沉淀蛋白，冻干得到蛋白干粉；(3)步骤(2)所得蛋白干粉用等电聚焦上样缓冲液溶解，用于固相预制胶条的水化和聚焦；(4)聚焦完的固相预制胶条用SDS平衡液平衡，时间为10-20分钟。