适于选择产生目标多肽的文库克隆的表达克隆方法

摘要

本发明涉及用于产生目标重组多肽的方法，所述方法包括步骤：a)提供编码一种或多种目标多肽的多核苷酸文库，其中在包含至少下述元件的表达克隆载体中制备文库：i)编码选择性标记的多核苷酸；ii)真菌复制起始序列，优选自主复制序列(ARS)；和iii)以连续顺序包含下述的多核苷酸：源自真菌细胞的启动子、可将文库克隆入其中的克隆位点，和转录终止子；b)用文库转化亲本丝状真菌宿主细胞的突变体，其中与亲本相比，降低了在突变体中非同源重组的频率；c)在适合表达多核苷酸文库的条件下培养(b)中获得的转化宿主细胞；和d)选择可产生目标多肽的转化宿主细胞。

主权项

1.用于产生目标重组多肽的方法，所述方法包括步骤：a)提供编码一种或多种目标多肽的多核苷酸文库，其中在包含至少下述元件的表达克隆载体中制备所述文库：i)编码选择性标记的多核苷酸；ii)真菌复制起始序列，优选自主复制序列(ARS)；和iii)以连续顺序(in sequential order)包含下述的多核苷酸：源自真菌细胞的启动子、可将文库克隆入其中的克隆位点，和转录终止子；b)用所述文库转化亲本丝状真菌宿主细胞的突变体，其中与亲本相比，突变体中非同源重组的频率降低；c)在适合表达所述多核苷酸文库的条件下培养(b)中获得的经转化的宿主细胞；和d)选择产生目标多肽的经转化的宿主细胞。