| 摘要 |
1. Способ получения белка ТАТ-НОХВ4Н, включающий следующие этапы: ! (a) обеспечение клетки-хозяина, включающей в себя вектор, кодирующий белок; ! (b) экспрессия белка в клетке-хозяине; ! (c) сбор неочищенного раствора экспрессированного белка; ! (d) очистка белка из раствора за счет следующих этапов: ! (i) введение раствора в колонну HisTrap; ! (ii) промывка колонны HisTrap; ! (iii) элюирование частично очищенного белка из колонны HisTrap для получения частично очищенного раствора белка; ! (iv) введение частично очищенного раствора белка в колонну MonoSP; ! (v) промывка колонны MonoSP; ! (vi) элюирование очищенного белка из колонны MonoSP в денатурированной форме; ! (e) свертывание элюированного денатурированного белка с использованием гидрофобных соединений за счет следующих этапов: ! (i) объединение элюированного денатурированного белка и раствора гидрофобных соединений для получения раствора белка и гидрофобных соединений; ! (ii) обессоливание раствора белка и гидрофобных соединений для получения раствора обессоленного белка и гидрофобных соединений; ! (iii) удаление гидрофобных соединений из раствора обессоленного белка с использованием ультрафильтрации. ! 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что колонну HisTrap промывают промывающим буферным раствором, содержащим мочевину 8 моль, HEPES 20 ммоль, DTT 0,5 ммоль, NaCl 100 ммоль, рН 8,0 и имидазол 10 ммоль. ! 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что частично очищенный белок из колонны HisTrap элюируют элюирующим буферным раствором, содержащим не менее 50 ммоль имидазола, 8 моль мочевины, 20 ммоль HEPES, 0,5 ммоль DTT, 100 ммоль NaCl, при рН 8,0. ! 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что частично очищенный белок из колонны HisTrap элюируют элюирующим буферным р |
