改良多聚核苷酸合成的方法和成分

摘要

在合成多核苷酸中，通过保护寡核苷酸3′末端，然后用其作为引物可提高合成多聚核苷酸的灵敏度和特异性。保护多聚核苷酸的3′末端可以阻止非特异性的链延长。然后温度提高时在热稳定酶作用下去除阻断基团，从而进行模板特异性的多聚核苷酸合成。该发明同时也提供了3′末端带有阻断基团的寡核苷酸以及在高温下可去除阻断基团的热稳定酶。该发明中的组分及方法在多种DNA/RNA扩增和分析技术中非常有用，包括医学遗传研究、诊断，病原体检测，法医，及动植物遗传应用等。

主权项

1.在已有的多聚核苷酸序列分子3′羟基末端增加一个核苷的方法，包括：(A)把可能含有目的多聚核苷酸分子的样品与反应混合物混合，反应混合物包括：(1)与既定目的多聚核苷酸分子配对的引物，引物的3′羟基末端受基团保护，阻止链延伸；(2)热稳定阻断基团去除酶，即TBGRE；所述的TBGRE为能在38℃以上温度有效去除3’-阻断基团的天然的或者人工酶；(3)一个热稳定多聚核苷酸聚合酶；(4)至少一种5′核苷三磷酸，以及(B)混合物温度提高至高于38℃时，产生的引物延伸产物。