一种采用细胞团块悬浮培养生产川贝母总生物碱的方法

摘要

本发明公开了一种采用细胞团块悬浮培养生产川贝母总生物碱的方法，该方法将经过诱导培养获得的川贝母细胞团块切成3～4mm大小，接入液体培养基中进行悬浮培养，最终获得生物碱含量高(为市售川贝母鳞茎的2.04倍)，且生长周期短(仅为24～28天)的培养产物。该方法较好地解决了川贝母传统生产方法中存在的时间长，药材产量和有效成分含量低等问题，可实现大规模快速生产川贝母药材有效成分的目的。

主权项

1.一种采用细胞团块悬浮培养生产川贝母总生物碱的方法，其特征在于包括下列步骤：(1)细胞团块的获得：将由川贝母鳞片叶诱导产生的愈伤组织切成适当大小转接到产生细胞团块的培养基MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.1～1.0mg·L-1+蔗糖30～50g·L-1+琼脂5.5～7.0g·L-1中进行培养，所采用的pH值为5.6～6.0，培养温度18～22℃、每天光照8～12小时、光照强度为1000～1800lx；(2)细胞团块的悬浮培养：将(1)步骤获得的细胞团块切成2～8mm的小块转入到液体培养基MS+6-BA1.0～2.0mg·L-1+NAA0.1～0.5mg·L-1+蔗糖20～40g·L-1+病毒唑5～20mg·L-1中进行悬浮培养，所采用的pH值为5.5～6.0，细胞团块的接种量为10～50g·L-1，培养温度18～22℃、每天光照8～12小时、光照强度为600～1000lx，摇床转速为120～140r/min；(3)细胞团块的继代培养：采用与步骤(2)相同的培养条件，在细胞团块接入液体培养基后35天进行第一次继代培养，以后在24～28天继代一次，每次继代时将原培养液倒掉，然后补加培养液并保持细胞团块培养物占培养液总体积的1/5～1/3；(4)获得有效成分含量高的培养物：将继代培养的细胞团块过滤并经减压抽滤至细胞团块不再滴水为止，然后将细胞团块置于烘箱中烘干至恒重，即获得生物碱含量高的培养产物。