一种基于RT-LAMP技术的H3亚型流感快速检测分型方法

摘要

本发明公开一种基于RT-LAMP技术的H3亚型流感快速检测分型方法，一、对流感病毒基因组序列数据库中H3亚型流感病毒的HA基因序列进行序列分析，设计出高特异的、高度保守的RT-LAMP专用引物，6条引物针对靶基因的8个区域，其中4条引物为FIP、BIP，F3和B3，另2条为loop引物LP1，LP2；二、对待检样本进行预处理后，提取样本的总RNA作为反应模板；三、配置RT-LAMP反应体系；四、将RNA模板本混入RT-LAMP反应体系中，置于水浴中，恒温条件下进行RT-LAMP扩增；五、将扩增后的反应产物进行判定，呈阳性则表示含有H3亚型流感病毒，呈阴性则表示H3亚型流感病毒。

主权项

1、一种基于RT-LAMP技术的H3亚型流感快速检测分型方法，它包括以下步骤：步骤一，检索流感病毒基因组序列数据库，对流感病毒基因组序列数据库中H3亚型流感病毒的HA基因序列进行序列分析，设计出6条高特异的、高度保守的RT-LAMP专用引物针对靶基因的8个区域，其中4条引物针对靶基因的6个区域，这4条引物为FIP、BIP，F3和B3，其余2条为loop引物LP1，LP2，loop引物LP1，LP2针对靶基因的2个区域；步骤二，收取待检样本进行预处理，然后从预处理后的待检样本中提取总RNA作为反应模板，总RNA在低温条件下进行保存待用；步骤三，配置RT-LAMP反应体系，首先在反应管中依次加入反应buffer，dNTPs，然后再加入LAMP专用引物FIP、BIP、F3、B3、LP1和LP2，逆转录酶和DNA扩增酶；步骤四，将步骤二中总RNA反应模板混入步骤三所配制的RT-LAMP反应体系置于水浴中，恒温条件下进行RT-LAMP扩增；步骤五，将步骤四中扩增后的反应产物进行判定，呈阳性则表示样本中含有H3亚型流感病毒，呈阴性则表示不含有H3亚型流感病毒。