用于荧光定量PCR法检测肠道滑念珠菌的试剂盒

摘要

本发明涉及一种试剂盒，旨在提供一种用于荧光定量PCR法检测肠道滑念珠菌的试剂盒。该试剂盒包括标准阳性模版和两条PCR扩增过程中使用的特异性扩增滑念珠菌ITS区的引物，其中编码扩增产物的基因具有SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。本发明操作简便、快速；特异性好，灵敏度高；基于对核苷酸的检测，不受培养条件限制；定量检测，能真实反映肠道滑念珠菌定植和发生感染的情况；可同时进行高通量的样本检测。本发明提供的试剂盒可对肠道滑念珠菌进行快速定量检测，可以替代一直沿用的分离培养的传统诊断方法，并适于在临床实验室广泛推广应用。

主权项

1、一种用于荧光定量PCR法检测肠道近平滑念珠菌的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：反应总体积1/10的10×Taqman PCR buffer；各0.15μmol/L～1μmol/L的上游和下游引物；各200μmol/L的dATP、dTTP、dGTP、dCTP；2.0mmol/L～3.5mmol/L的MgCl2；0.05U/μl HOTSTART Taq DNA聚合酶；0.02×SYBR green I荧光染料；标准阳性模版，其浓度按定量标准曲线制备的要求系列稀释；余量为无菌双蒸水；所述两条引物为PCR扩增过程中使用的特异性扩增近平滑念珠菌ITS区的引物，其中：上游引物序列为：5’-CCTGTCCATTAGTTTATACTCCGC-3’；下游引物序列为：5’-AGATTAAACTCAACGAA-3’；所述标准阳性模版为近平滑念珠菌标准菌株DNA经前述引物扩增，扩增产物与pGEMT-TEasy载体连接后获得的标准质粒DNA；编码所述扩增产物的基因具有SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。