特异性结合伐地那非及其结构类似物的单克隆抗体的制备

摘要

特异性结合伐地那非及其结构类似物的单克隆抗体的制备，包括人工免疫抗原、人工检测抗原的合成、免疫小鼠、单克隆抗体的筛选、单克隆抗体的结构特异性鉴定，把M-BSA和伐地那非混合，调节pH，加入戊二醛连接剂；磁力搅拌器缓慢搅拌反应；用蒸馏水透析，冷冻真空干燥，合成得人工免疫抗原；把M-OVA和伐地那非混合，调节pH，加入戊二醛连接剂；磁力搅拌器缓慢搅拌反应；用蒸馏水透析，冷冻真空干燥，合成得人工检测抗原；以竞争抑制ELISA方法检测单克隆抗体对伐地那非和piperidenafil的交叉反应，鉴别出交叉反应率大的、能够特异性结合伐地那非及其结构类似物的单克隆抗体。本发明制备的单克隆抗体对伐地那非及其结构类似物的亲和力平衡常数大于10⁹M^-1。

主权项

1、特异性结合伐地那非及其结构类似物的单克隆抗体的制备，包括人工免疫抗原、人工检测抗原的合成、免疫小鼠、单克隆抗体的筛选、单克隆抗体的结构特异性鉴定，其特征是所述人工免疫抗原合成步骤为：把M-BSA和伐地那非以1/160-180摩尔比混合，调节pH到4.5-5.0，加入摩尔数为伐地那非1/5.5-1/6.5的戊二醛连接剂；在25-30℃下用磁力搅拌器缓慢搅拌反应24小时；用蒸馏水4℃透析3天，冷冻真空干燥，4℃保存备用；所述人工检测抗原合成步骤为：把M-OVA和伐地那非以1/100-120的摩尔比混合，调节pH到4.5-5.0，加入摩尔数为伐地那非1/3-1/4的戊二醛连接剂；在25-30℃下用磁力搅拌器缓慢搅拌反应24小时；用蒸馏水4℃透析3天，冷冻真空干燥，4℃保存备用；所述单克隆抗体的结构特异性鉴定是以竞争抑制ELISA方法检测每株单克隆抗体对伐地那非和piperidenafil的交叉反应，交叉反应率大的单克隆抗体就是能够特异性结合伐地那非及其结构类似物的单克隆抗体。