一种大孔树脂用于细菌多糖中内毒素去除的方法

摘要

本发明一种大孔树脂用于细菌多糖中内毒素去除的方法，属于生物技术领域，其步骤为：利用生物反应器对细菌进行发酵培养，制备粗糖，粗糖经冷酚抽提去蛋白，用钙离子螯合剂-表面活性剂混合缓冲液进行超滤后，用大孔树脂吸附去除内毒素，获得内毒素含量低的细菌多糖。本发明获得的内毒素含量低的细菌多糖适合于制备细菌多糖疫苗及细菌多糖结合疫苗。

主权项

1、一种大孔树脂用于细菌多糖中内毒素去除的方法，其步骤是：(1)采用生物反应器对细菌进行发酵培养；(2)于对数生长后期杀菌后，离心收集上清液；(3)在上清液中加入十六烷基三甲基溴化铵，离心收集沉淀；(4)沉淀中加入1mol/L CaCl2溶液解离，加入乙醇至终浓度25％，离心收集上清液；(5)上清液加入乙醇至50~90％；离心收集多糖沉淀；(6)多糖沉淀分别用无水乙醇、丙酮各洗涤2次；(7)洗涤后的多糖经冷冻干燥获得粗制多糖；(8)粗糖按5～50mg/ml溶解于1/10饱和中性醋酸钠溶液中，用冷酚萃取1～10次，离心收集上清液；(9)上清液采用含1~15％钙离子螯合剂与0.1~2.0％表面活性剂的混合缓冲液超滤；(10)在超滤浓缩液中加入预处理的大孔树脂，吸附4～8小时；(11)2000～5000rpm的条件下离心10～60分钟，收集上清液；(12)上清液采用注射用水，3～300KD膜进行超滤；(13)超滤浓缩液中加入CaCl2溶液至终浓度0.1-2mol/L，乙醇浓度20～30％进行沉淀，离心收集上清液；(14)上清液采用3～300KD膜进行超滤；(15)超滤后液加入CaCl2或NaCl溶液至终浓度0.1-2mol/L，乙醇溶液至终浓度50-90％沉淀多糖，离心收集多糖沉淀；(16)多糖沉淀分别用无水乙醇、丙酮各洗涤2次；(17)洗涤的多糖经冷冻干燥，获得内毒素含量低的精制多糖。