发明名称 | SGAE标签3’端cDNA片段的克隆方法 | ||
摘要 | 一种生物技术领域的SGAE标签3’端cDNA片段的克隆方法,包括如下步骤:利用修饰的oligo(dT<sub>16</sub>)反转录所有的mRMA,然后利用鼠源逆转录酶在合成的第一条cDNA的3’端添加3-5个胞嘧啶碱基,利用引物合成第一条cDNA的互补链,根据cDNA两端的已知序列合成一对引物,进行PCR扩增,富集所有的cDNA;以步骤一富集得到的cDNA为模板,采用半巢式PCR克隆含tag的特异性片段。本发明更加容易获得含有tag标签的特异性片段,过程更加简单,费用更加低廉。 | ||
申请公布号 | CN101514353A | 申请公布日期 | 2009.08.26 |
申请号 | CN200910046354.9 | 申请日期 | 2009.02.19 |
申请人 | 上海交通大学 | 发明人 | 乔中东;徐汪节;李巧丽;王朝霞;史节平 |
分类号 | C12P19/34(2006.01)I | 主分类号 | C12P19/34(2006.01)I |
代理机构 | 上海交达专利事务所 | 代理人 | 王锡麟;王桂忠 |
主权项 | 1、一种SGAE标签3’端cDNA片段的克隆方法,其特征在于,包括如下步骤:步骤一,利用修饰的oligo(dT16)反转录所有的mRMA,然后利用鼠源逆转录酶在合成的第一条cDNA的3’端添加3-5个胞嘧啶碱基,利用引物合成第一条cDNA的互补链,根据cDNA两端的已知序列合成一对引物,进行PCR扩增,富集所有的cDNA;步骤二,以步骤一富集得到的cDNA为模板,采用半巢式PCR克隆含tag的特异性片段。 | ||
地址 | 200240上海市闵行区东川路800号 |