一种利用不同程度的连续易错PCR进行定向进化的方法

摘要

本发明涉及一种利用不同程度的连续易错PCR进行定向进化的方法，包括：选择目的基因为模板设计引物；配制高、中、低不同程度的d[X]TP易错PCR体系；将配制好的PCR反应体系放入PCR仪中进行PCR扩增；将易错PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳回收，进行酶切、与载体连接、转化，进行阳性克隆筛选，提取质粒；以提取的质粒为模板，进行第二轮易错PCR；利用相应筛选系统进行有用突变的筛选。该方法操作简单，操作简单，突变频率高、产量稳定，可为定向进化蛋白质提供新的思路和途径。

主权项

1. 一种利用不同程度的连续易错PCR进行定向进化的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)选择目的基因为模板设计引物；(2)配制高、中、低不同程度的d[X]TP易错PCR体系；(3)将配制好的PCR反应体系放入PCR仪中进行PCR扩增；(4)将易错PCR产物通过琼脂糖凝胶电泳回收，进行酶切、与载体连接、转化，进行阳性克隆筛选，提取质粒，(5)以提取的质粒为模板，重复步骤(1)～(4)进行第二轮易错PCR；(6)重复步骤(5)，利用相应筛选系统进行有用突变的筛选。