海带游、胚孢子的超低温快速冷冻保存法

摘要

本发明公开了一种海带游(胚)孢子的超低温快速冷冻保存法，该方法包括以下步骤：材料处理、平衡、快速冻存和复苏。本发明改进已有的继代培养保存无性系技术的不足，提供了一种用于海带孢子保存、简便易行、可大量保存种质材料、成活率较高的海带游(胚)孢子的超低温快速冷冻保存法。

主权项

1、海带游、胚孢子的超低温快速冷冻保存法，该方法包括以下步骤：材料处理、平衡、快速冻存和复苏，其特征是：材料处理是选择孢子囊色泽呈墨绿色、表面有白色的薄膜开始脱落的海带，剪取带有孢子囊的叶片，用脱脂棉和消毒海水反复搽洗十余遍，置于烧杯中，倒入5-10℃低温消毒海水，放散孢子，孢子浓度达到80-100/160×时，用300目筛绢滤出杂质和黏液获得孢子悬液；平衡是将孢子悬液与消毒海水配制的20％DMSO按1∶1比例混合，在0-4℃冰箱中平衡15min；快速冻存是将平衡后的孢子混合液装入1.5ml冻存管中，冻存管直接投入液氮；复苏是超低温冷冻后，将冻存管从液氮中取出，迅速移到39℃恒温水浴中快速震荡，至最后一粒冰晶消失倒入培养液中培养。