废水生物处理反应器中微生物群落组成的快速分子检测方法

摘要

废水生物处理反应器中微生物群落组成的快速分子检测方法，①收集废水生物处理反应器中微生物样品进行预处理，利用苯酚-氯仿法提取基因组总DNA；②使用16S rDNAV3区引物对样品DNA进行PCR扩增；③利用变性梯度凝胶电泳分析PCR扩增产物；④得到的DGGE图谱利用软件分析，并根据切胶测序特征DGGE条带，对所代表的微生物进行鉴定；⑤根据条带所代表的微生物种类来设计构建变性梯度凝胶电泳数据库作为快速分子检测的对照标准；所述变性梯度凝胶电泳集合库是根据PCR产物经DGGE分离后的条带通过切胶克隆测序然后在Genbank中同源比对明确其代表的微生物种类来设计构建的；作为快速分子检测方法的对照标准。

主权项

1. 一种废水生物处理反应器中微生物群落组成的快速分子检测方法，其特征在于，具体步骤如下：①收集废水生物处理反应器中微生物样品进行预处理，利用苯酚-氯仿法提取基因组总DNA；②使用16S rDNA V3区引物[341F-GC和518R(细菌)；344F-GC和518R(古菌)]对样品DNA进行PCR扩增；③利用变性梯度凝胶电泳即DGGE技术分析PCR扩增产物；④得到的DGGE图谱利用Quantity one软件分析，并根据切胶测序特征DGGE条带，对所代表的微生物进行鉴定；⑤根据条带所代表的微生物种类来设计构建变性梯度凝胶电泳数据库DGGEMarker作为快速分子检测的对照标准；所述变性梯度凝胶电泳集合库DGGE Marker是根据PCR产物经DGGE分离后的条带通过切胶克隆测序然后在Genbank中同源比对明确其代表的微生物种类来设计构建的；直接采用已知条带的PCR产物混合或者将已知条带所对应的纯培养物DNA进行PCR扩增产物混合，从而作为快速分子检测方法的对照标准。