| 摘要 |
1. Способ выявления вируса африканской чумы лошадей, включающий выделение РНК из биологического материала, постановку полимеразной цепной реакции с использованием синтезированных праймеров, амплификацию РНК вируса, оценку проведения реакции гель-электрофорезом в агарозе, отличающийся тем что, проводят предварительную денатурацию вирусной РНК при 85°С в течение 4 мин с быстрым последующим ее охлаждением, синтез кДНК проводят при 42°С в течение 30 мин, а для постановки ПЦР выбраны и синтезированы два праймера, имеющие следующий нуклеотидный состав: ! 5'-ggt сса ctc ttg gtt atg gaa ctt tac agc-3' ! 5'-ggt ctg cag tca ctt tgt aag gtg tct taa agt-3' ! комплементарными консервативной области генома NS2 вируса АЧЛ с предварительным циклом денатурации 94°С 3 мин, с последующими 30 циклами амплификации при температуре денатурации 94° 10 сек, отжига 55°С 20 с, элонгации при 72°С 15 с, с завершающим циклом элонгации 72°С в течение 1 мин, затем проводят учет результатов реакции без предварительной рестрикции полученного продукта. ! 2. Тест-система для обнаружения ДНК вируса африканской чумы лошадей, включающая пластиковые флаконы и пробирки, термостабильный фермент Tag-полимеразу, ПЦР-смесь для постановки реакции, положительный и отрицательный контроли, отличающаяся тем, что содержит три набора: ! 1) набор для выделения нуклеиновых кислот, включающий нуклеосорбент с отмывочным буфером на основе гуанидинтиоционата; 2) набор для постановки ПЦР, содержащий реакционную смесь для постановки ПЦР и синтетические олигонуклеотидные праймеры по п.1; 3) набор для проведения электрофореза, включающий агарозу и буфер для электрофореза с бромистым этидием. |
