紫外诱导突变在增强蛭弧菌裂解性能中的应用

摘要

本发明属于微生物诱变育种技术领域，具体涉及紫外诱导突变在增强蛭弧菌裂解性能中的应用。本应用是以紫外线诱导突变为主，同时辅助以红外光源以及LiCl强化诱变，在缓慢搅拌下诱导突变，时间为2～8min，照射距离为5～20cm；避光冰浴保存，累加诱变直至达到所需。本发明方法简单、操作方便，增强蛭弧菌裂解性能效果显著，经检验证实：可以裂解原来不能裂解的两株沙门氏菌，以及数种革兰氏阳性菌，包括产气荚膜杆菌、艰难梭菌、猪链球菌以及肠球菌，解决了通常蛭弧菌不能裂解革兰氏阳性菌、纵使可以裂解但裂解能力极弱的问题，拓宽了蛭弧菌的应用范围。

主权项

1、紫外诱导突变在增强蛭弧菌裂解性能中的应用，其特征在于，本应用是以紫外线诱导突变为主，同时辅助以红外光源以及LiCl强化诱变，它包括以下具体步骤及其条件：(1)稳定光波在暗室中，将紫外光源置于操作台面上方，辅助红外光源置于操作台面两侧，操作前30～60min打开紫外光源，稳定光波，其紫外光源的功率为10～25W，红外光源的功率为15～50W；(2)无菌诱导突变在滤过可见光状态下，先将浓度大于105pfu/mL的蛭弧菌浓缩液加入无菌培养皿中，再向培养皿加入LiCl溶液并将其终浓度维持在0.1～0.5％，加入无菌磁力转子开启磁力搅拌，在缓慢搅拌下将培养皿置于紫外光源正下方，同时打开辅助红外光源，开始诱导突变，诱变时间为2～8min，照射距离为5～20cm；所述的蛭弧菌浓缩液是由蛭弧菌野生株Bdellovibrio sp.BDJ01经离心浓缩得到，蛭弧菌野生株Bdellovibrio sp.BDJ01保藏于中国武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M208011；(3)冰浴保存关闭紫外、红外光源，取出菌液立即避光，并置于冰浴中保存至少1小时；(4)累加诱变用步骤(3)中裂解能力已有增强的蛭弧菌诱变株，按步骤(2)、(3)重复操作1～10次累加诱变，直至得到能裂解至少两种革兰氏阳性菌的蛭弧菌诱变株。