一种制备用于检测猪瘟病毒血清抗体的可溶性E2抗原的方法

摘要

一种制备用于检测猪瘟病毒血清抗体的可溶性E2抗原的方法，包括下述步骤：A.克隆E2基因抗原结构域部分；B.构建重组表达载体；C.在LB培养基中表达，获得可溶性的重组E2蛋白；D.亲和层析纯化重组E2蛋白；E.pGST-E2表达蛋白的鉴定，SDS-PAGE和Western Blotting鉴定表达的重组E2蛋白；F.利用重组E2蛋白建立检测猪瘟血清抗体间接ELISA方法。本发明改良了传统的LB培养基，促进可溶性的E2蛋白表达；解决了猪瘟病毒E2抗原在大肠杆菌中主要以包涵体表达的难题，获得的可溶性E2蛋白与完整猪瘟病毒粒子具有相似的免疫学效果，可作为替代猪瘟病毒粒子的抗原，建立敏感性、特异、安全和可靠的猪瘟病毒血清抗体的检测间接ELISA方法。

主权项

1、一种制备用于检测猪瘟病毒血清抗体的可溶性E2抗原的方法，其特征在于，包括下述步骤：A. 克隆E2基因抗原结构域部分：A. 1、设计1对特异性寡核苷酸引物uE和dE；A. 2、提取总RNA，从猪瘟兔化弱毒疫苗中提取核糖核酸-RNA；A. 3、反转录合成cDNA，以提取的核糖核酸RNA为模板，反转录合成cDNA；A. 4、PCR扩增E2基因，用所述的1对特异性寡核苷酸引物，进行聚合酶链式扩增反应扩增；B. 构建重组表达载体；C. 在改良的LB培养基中表达，获得可溶性的重组E2蛋白；D. 亲和层析纯化重组E2蛋白；E. pGST-E2表达蛋白的鉴定，SDS-PAGE和Western Blotting鉴定表达的重组E2蛋白；F. 利用重组E2蛋白建立检测猪瘟血清抗体间接ELISA方法。上述步骤C所述改良的LB培养基成分中含有蛋白胨0.8％；氯化钠0.9％；酵母提取物0.6％，葡萄糖0.1％g加无离子水，调pH＝7.4。