在甲醇酵母PichiaPastoris中表达重组牛生长激素

摘要

本发明涉及在甲醇酵母PichiaPastoris中表达重组牛生长激素。在近二十年的开发使用中，P.Pastoris已用于许多外源基因的表达，比其他真核表达系统相比具有快捷，方便和便宜的特点，而且通常能得到更高的表达量。本发明构建一种能够在胞内或胞外高效表达牛生长激素的酵母工程菌PichiaPastoris，可以作为饵料添加剂。

主权项

1. 一种在甲醇酵母Pichia Pastoris中表达重组牛生长激素的方法，该方法包括以下步骤：(1)通过PCR方法从牛脑cDNA中克隆了生长激素基因；(2)将牛生长激素基因克隆到pPIC9k质粒载体中；(3)将克隆有牛生长激素基因的pPIC9k载体电击转化到甲醇营养型酵母GS115中；(4)经不同浓度的G418筛选得到高拷贝插入的重组菌株，表型为His+Mut+；(5)用Western Blotting和SDS-PAGE电泳实验证明表达产物存在于表达上清中，表达产物蛋白可以和生长激素多抗结合；(6)在摇瓶表达培养基中以甲醇诱导外源基因的表达，表达上清经50kDa和3kDa超滤膜纯化后再经S-Sepharose Fast Flow及Sephadex-G25纯化后，得到重组牛生长激素。