基因型分型方法

摘要

一种基因型分型方法，改良的多重聚合酶链式反应包括一个同步聚合酶链式反应以及一个特异性聚合酶链式反应，而且这两个扩增步骤皆可以递减策略来进行，其中宽松的递减策略是以低于最佳退火温度的温度来使用，而严谨的递减策略是以高于最佳退火温度的温度来使用。通过整合一个两阶段的扩增反应以及采用条件化递减策略的多重聚合酶链式反应，达成同时以高可信度和高可用率扩增多个DNA序列，且具有高产出率以及低成本效益的方法。

主权项

1、一种基因型分型方法，其特征是：它包括下列步骤：(1)通过采用第一递减程序的多重聚合酶链式反应在一带有许多引物对及基因组DNA的混合液中同步扩增多种核苷酸序列分子；(2)采用第二递减程序的多重独立聚合酶链式反应，每一该独立聚合酶链式反应通过一对指定的引物扩增来自前一步骤制造的多重聚合酶链式反应产物中的一特定的核苷酸序列分子；其中，该第一递减程序使用的第一退火温度等于一最佳化的退火温度，并且该第二递减程序使用的第二退火温度高于该最佳化的退火温度；或，该第一递减程序使用的第一退火温度低于一最佳化的退火温度，并且该第二递减程序使用的第二退火温度等于该最佳化的退火温度；或，该第一递减程序使用的第一退火温度低于一最佳化的退火温度，并且该第二递减程序使用的第二退火温度高于该最佳化的退火温度；该最佳化的退火温度是通过使用同一个基因组DNA样本和每一个引物对进行PCR来完成递减PCR的循环而产生。