蛹虫草子实体水溶性肽多糖的快速分离纯化方法

摘要

本发明公开了蛹虫草子实体水溶性肽多糖的快速分离纯化方法，属于生物活性物质提取技术领域。方法包括：取蛹虫草子实体烘干、粉碎；超纯水提取得组分CF1；分子筛分离得组分CF1－1；离子交换柱分离、纯化得组分CF1－1－1与CF1－1－2；亲和层析柱分离、纯化得肽多糖CF1－1－1－1、CF1－1－2－1与CF1－1－2－2。本发明采用蛹虫草子实体粉碎后水提取物直接上柱的纯化方法，极大地提高了效率，降低了成本，并且整个分离纯化过程不使用有机溶剂，真正使多糖提取分离纯化达到绿色、快速、高效的目的。本方法可在企业或实验室有关蛹虫草子实体水溶性肽多糖分离纯化的工艺中推广应用。

主权项

1.蛹虫草子实体水溶性肽多糖的快速分离纯化方法，其特征在于该方法按以下步骤进行：(1)取蛹虫草子实体，烘干粉碎，过200目筛；(2)超纯水提取：将蛹虫草子实体粉与超纯水按重量1∶20～50比例，分3次加水、提取，每次在50～100℃，提取4小时后，离心5000转/分、离心时间20分钟，取上清液；合并3次上清液，用0.22μm微滤膜过滤，过滤液为组分CF1；(3)分子筛分离：采用AKTA Purifier 100蛋白质分离纯化系统设备配岛津RID-10A示差检测器，滤液CF1直接上分子筛凝胶柱，以超纯水作流动相，流速为1.0ml/min，同时用三个波段280，260，215λm紫外检测和一个示差检测器检测，收集第一峰经硫酸苯酚法和考马斯亮蓝法检测确认为是含肽链多糖物质的组分CF1-1；CF1-1直接进入下一步骤或将其冻干呈灰白色，备用；(4)离子交换柱分离、纯化：将组分CF1-1上弱阴离子交换柱，先用超纯水作流动相洗脱，流速为1ml/min，得一峰组分CF1-1-1；然后用1M的NaCl作流动相洗脱，流速为1ml/min，得组分CF1-1-2；(5)亲和层析柱分离、纯化：将组分CF1-1-1上亲和层析柱，用20mM Tris-HClpH 7.4+0.5M NaCl亲和缓冲液作流动相洗脱，流速为1ml/min，没有峰出现；再用pH6.5的0.1M硼酸钠再生缓冲液作流动相洗脱，流速为1ml/min，得一峰CF1-1-1-1为肽多糖1；将组分CF1-1-2上亲和层析柱，用20mM Tris-HCl pH 7.4+0.5M NaCl亲和缓冲液作流动相洗脱，流速为1ml/min，得CF1-1-2-1为肽多糖2，再用pH6.5的0.1M硼酸钠再生缓冲液作流动相洗脱，流速为1ml/min，得CF1-1-2-2为肽多糖3。