冬虫夏草中多球壳菌素含量的测定方法

摘要

本发明公开了一种冬虫夏草中多球壳菌素含量的测定方法，包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备：精密称取多球壳菌素对照品，加甲醇制成0.001～1.0mg/ml的多球壳菌素对照品溶液备用；(2)标准曲线的制作；(3)供试品溶液的制备：经过提取、过固相萃取柱及供试品定容；(4)采用高效液相色谱仪进行测定。该方法的有益效果是测定效果稳定，重现性、精密度良好，测量结果准确。对有效利用冬虫夏草资源，控制人工冬虫夏草药材质量，以及开发多球壳菌素均具有重要意义。

主权项

1、一种冬虫夏草中多球壳菌素含量的测定方法，包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备精密称取多球壳菌素对照品，加甲醇制成0.001～1.0mg/mL的多球壳菌素对照品溶液备用；(2)标准曲线的制作取多球壳菌素对照品溶液适量，分别精密吸取1、10、20、40、50μL注入高效液相色谱仪；采用色谱柱：C18色谱柱，流动相∶乙腈与水体积比20～80∶80～20，流速0.6～1.2mL/min，柱温20～65℃，检测波长190～215nm；测定峰面积，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；(3)供试品溶液的制备提取：取冬虫夏草样品，经粉碎，通过20～200目的分样筛，然后精密称取0.1～5g置入容器中，加10～250mL溶剂提取，随后移出上清液，同法提取1～3次，得总提取液；其中所述冬虫夏草样品的提取溶剂为甲醇、乙醇、水的一种或它们的混合溶剂；所述提取方法采用超声提取法、加热回流提取法、浸泡提取法的一种；过固相萃取柱：定量移取总提取液在常压或减压下挥干后用浓度小于50％的甲醇溶液或水1～10mL溶解，离心，取上清液作上样液；将上样液加到十八烷基固相萃取柱上，待上样液通过十八烷基固相萃取柱后，第一次用浓度小于50％的甲醇溶液或水冲洗，冲洗液弃之；随后第二次用60％～100％的甲醇溶液洗脱，收集洗脱液；其中所述十八烷基固相萃取柱上样前先用甲醇活化和蒸馏水平衡；供试品定容：收集含有多球壳菌素的洗脱液在常压或减压下挥干，向挥干后的残留物加入甲醇溶解，甲醇溶解液离心，取上清液即得供试品溶液；或甲醇溶解液用微孔滤膜过滤，取续滤液得供试品溶液；(4)采用高效液相色谱仪进行测定取供试品溶液，进样量为1～60μL，在步骤(2)的条件下进行HPLC测定，根据标准曲线，采用外标法确定多球壳菌素的含量。