快速检测新城疫病毒的方法及其免疫胶体金测试卡

摘要

本发明提供一种快速检测新城疫病毒的方法，包括如下步骤：建立新城疫病毒单克隆抗体和羊抗新城疫病毒多克隆抗体以及羊抗Balb/C小鼠免疫球蛋白抗体；对结合垫和NC膜的处理；将待检测的样品加在样品垫上过滤后，样品中的NDV与结合垫中的金标抗体结合，通过层析作用先与NC膜上的Ab2结合形成可见的结合线，未结合完的金标抗体继续层析与Ab3结合，形成第二条；最后观察结果：阳性则出现两条结合线；阴性则仅出现一条质控线。具有操作简单、快速、敏感和特异性好等特点。并且价额低廉，适用于基层或临床检测新城疫病毒；可以检测禽类血液、粪便的新城疫病毒，10min左右出结果，敏感性达10ng/ml。本发明还提供了实现所述方法的新城疫免疫胶体金测试卡。

主权项

1、一种快速检测新城疫病毒的方法，包括如下步骤：1)建立新城疫病毒单克隆抗体(Ab1，Antibody 1)和羊抗新城疫病毒多克隆抗体(Ab2，Antibody 2)以及羊抗Balb/C小鼠免疫球蛋白抗体(Ab3，Antibody 3)；其中，新城疫病毒单克隆抗体是利用杂交瘤技术通过细胞融合，克隆筛选制成特异性新城疫病毒单克隆抗体；羊抗NDV抗体是用纯化NDV抗原免疫山羊后，提取免疫羊血清中的免疫球蛋白制成；羊抗Balb/C小鼠免疫球蛋白抗体是用Balb/C小鼠的免疫球蛋白作为抗原，免疫羊，提取免疫羊血清中的抗体球蛋白制成；2)结合垫和NC膜的处理：将玻璃纤维膜结合垫浸泡于80mM Na2B4O710H2O，0.1％PVA，0.1％Tween-20，0.3％BSA的处理液中，于4℃条件下浸泡10-12h；然后于37℃温度下烘干4-5h，再将所述新城疫病毒单克隆抗体(Ab1)标记胶体金并喷在结合垫上；NC膜上分别喷有线宽为1mm的所述羊抗新城疫病毒多克隆抗体(Ab2)作为捕获抗体，以及线宽为1mm的所述羊抗Balb/C小鼠免疫球蛋白抗体(Ab3)作为质控抗体；3)将待检测的样品加在样品垫上过滤后，样品中的NDV与结合垫中的(Ab1)金标抗体结合，通过层析作用先与NC膜上的(Ab2)结合形成可见的结合线，未结合完的金标抗体继续层析与(Ab3)结合，形成第二条；4)观察结果：阳性则出现两条结合线；阴性则仅出现一条质控线；试剂条无效则不出现线条。