家蚕丝腺生物工厂的建立方法及其制药用途

摘要

本发明公开了一种构建家蚕丝腺生物工厂的方法，以转座子piggyBAC因子为基础载体，通过基因工程操作构建带有家蚕丝蛋白特异性启动子控制外源基因表达盒、增强子活性的元件、抗生素抗性基因和荧光蛋白报告基因的重组转基因载体，与辅助质粒作混合，导入初产卵，孵化后的蚁蚕连续添食特定抗生素至4龄眠，获得抗特定抗生素、带有荧光蛋白报告基因的家蚕，检测到目的基因，育种制成转基因家蚕。利用该转基因家蚕的丝腺组织可获得药用蛋白药物。本发明方法实现转基因家蚕丝腺工厂制备药用蛋白药物，生产成本低，不涉及具有潜在危害的杆状病毒，安全性高，具有重要的实施价值。

主权项

1.一种构建家蚕丝腺生物工厂的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)构建带有家蚕丝腺特异性表达基因的启动子X控制外源蛋白基因表达盒；(2)构建带有增强子元件en的基于piggyBAC转座子的带有荧光蛋白报告基因的载体pigA3-en；(3)双酶切步骤(1)所得载体，回收启动子X控制外源基因的片段，克隆进同样双酶切的pigA3-en，得带有增强子en和启动子X控制外源基因的载体；(4)构建昆虫细胞内具有活性的启动子Y控制抗生素抗性基因的重组载体；(5)酶切步骤(4)所得载体，回收启动子Y控制抗性基因的片段，克隆进同样酶切的步骤(3)所得载体，得到带有荧光蛋白报告基因和启动子X控制外源基因表达盒、增强子元件、启动子Y控制抗生素抗性基因的重组转基因载体；(6)步骤(5)所得重组转基因载体，在辅助质粒的作用下，利用精子介导法导入初产卵，孵化，筛选获得带有抗生素抗性基因、荧光蛋白报告基因的家蚕，检测到目的基因，育种制成转基因家蚕。