细茎双蝴蝶的组织培养方法

摘要

本发明是细茎双蝴蝶的组织培养方法，是一种用于双蝴蝶属植物组织培养方法，涉及一种植物培养方法。该方法包括无菌苗获得和培养，增殖培养，生根培养，炼苗移栽等四个步骤。其中，上述培养条件，培养基均由L9(3⁴)正交试验、方差分析选出。①萌发培养基：MS+ZT 1.0mg.L－¹；②增殖培养基：MS+6BA 1.8mg.L－¹；③生根培养基：1/2MS+IBA 0.8m.L－¹以上培养基均添加3％蔗糖，1.1％卡拉胶，pH5.8，培养温度25±1℃，自控日光灯光源，光强2000LX，光照时间14h.d^－1，增殖时每30d更换一次培养基。该方法可以提高新芽的诱导率，繁殖系数和移栽成活率，克服了该种药用植物种子繁难度大的问题。

主权项

1.细茎双蝴蝶的组织培养方法，其特征在于采用下述步骤：第一步，无菌苗获得和培养：取一年生植株的根茎，去除叶片和叶柄，剪成6cm长的茎段，先用自来水洗净后用饱和洗衣粉溶液漂洗1-5分钟，再用自来水流水冲洗1-2小时，然后用蒸馏水冲洗1-2次以后在无菌室内于超净工作台上，用75％的酒精浸20-30s，并不断地摇动，以便充分杀菌；倒掉酒精，加入0.1％的升汞溶液和一滴吐温80浸泡8-10分钟，以进一步消毒，倒掉升汞溶液后，再用无菌水冲洗3-6次，置于无菌培养皿中干燥的无菌滤纸上，吸干表面水分，用利刀切成长1.5cm左右，每段有一个节的带芽茎段，以下端插入萌发培养基中，节和腋芽露在萌发培养基外，接种于萌发培养基上，暗培养5天后转入光照培养，6天后萌发培养基上外植体陆续萌动，长出嫩芽；第二步：增殖培养：接种后30-35d，芽长1-2cm时，选健康无杂菌感染的芽连同外植体一起移入增殖培养基上进行繁芽培养；接种40天后，苗高5cm左右，具3-4个节，繁殖系数5.1，以后每30-35d更换一次培养基；第三步：生根培养：当不定芽长到2-3cm，具3-4片叶时，将其切下，转接入生根培养基上，进行根的诱导，培养30天；第四步：炼苗移栽：当试管苗株高4cm左右，根长2-3cm时，选择生长健壮，根系发达的植株进行炼苗移栽，先将幼苗移出组培室，置于与日光下相比荫蔽度为70％的温室内闭瓶炼苗3d，进行光照适应性锻炼，再将培养瓶盖打开一半，半开瓶炼苗1天，再开瓶炼苗一天，然后将苗取出，洗净根部培养基，移栽于装有珍珠岩：红壤土：河砂比例为1∶2∶1的基质的塑料小花钵中，其基质应为0.1％高锰酸钾溶液或0.1％菌绝杀处理24小时，经每100kg水+少量MS培养液+1支链霉素喷雾洗净叶面和茎表面，待叶片表面无积水后，用透明塑料袋封好钵口，从第二天起，每天在封口塑料袋上刺一个筷子粗的孔，15天后去掉封口膜，进入正常生长，移栽至与原产地环境相似的油茶權木林下。