维持大肠癌肿瘤细胞短期生长的原代培养方法

摘要

本发明属于大肠癌肿瘤细胞原代培养技术领域。包括：1)手术获取新鲜肿瘤标本，清洗并剪去污秽及坏死区域，碘伏浸泡消毒，采用含双抗的PBS清洗液清洗；2)将上述肿瘤标本剪成细小组织块，静置、去上清液，之后再用含双抗的PBS清洗液清洗，离心分离，去上清液；3)采用胶原酶消化法或组织块贴壁法，在培养液中进行组织贴壁及细胞爬出；4)在上述培养液中继续培养并纯化处理，维持细胞生长至所需数量。常规原代培养方法培养良好状态的大肠癌肿瘤细胞，成功率很低(6％)，本发明所述的原代培养方法可达33％以上，显著提高了原代大肠癌细胞短期体外培养成功的概率，且工艺简单易行，成本低，为应用短期生长原代大肠癌细胞的实验研究提供了一个可供选择的良好平台。

主权项

1.一种维持大肠癌肿瘤细胞短期生长的原代培养方法，其特征在于包括以下工艺步骤：1)手术获取新鲜状态肿瘤标本，生理盐水清洗并剪去污秽及坏死区域后，碘伏浸泡消毒5分钟，采用含双抗的PBS清洗液清洗；2)在含双抗的PBS清洗液中将上述肿瘤标本剪成细小组织块，静置、去上清液，之后再用含双抗的PBS清洗液清洗，离心分离，去上清液；3)采用胶原酶消化法或组织块贴壁法，在培养液中进行组织贴壁及细胞爬出，所述的培养液为10-20％胎牛血清培养液；4)在上述培养液中继续培养并纯化处理，维持细胞生长至所需数量。