假俭草侧芽诱导愈伤组织和植株再生方法

摘要

本发明涉及一种假俭草侧芽诱导愈伤组织和植株再生方法，属于植物组织培养技术领域。以假俭草的侧芽为外植体材料，接种在附加2，4－D－二氯苯氧乙酸1.0mg/L、BAP－6－苄基氨基嘌呤0.1mg/L的愈伤组织诱导培养基上，愈伤组织的诱导频率达90％以上。继代培养2次后转到附加KT－激动素2.0mg/L的绿苗分化培养基上，绿苗分化率在12％以上。以侧芽为外植体材料，获得的黄色、紧密、颗粒状愈伤组织适用于假俭草微繁、体细胞培养和农杆菌介导法基因转化。草坪草坪用质量高，通常种子产量越低，以侧芽为外植体对于草坪草再生体系建立、暖季型草坪草改良以及新品种产业化具有独特的重要的应用价值。

主权项

1.假俭草侧芽诱导愈伤组织和植株再生方法，其特征在于，1)材料选用假俭草带有侧芽的茎段为外植体材料；2)培养基基本培养基：由MS的大量元素、微量元素和维生素组成，附加蔗糖30g/L，琼脂7.5g/L；侧芽生长培养基：基本培养基中添加激素BAP 2.0mg/L、NAA 0.8mg/L；愈伤组织诱导和继代培养基：基本培养基中添加激素2，4-D 1.0mg/L、BAP 0.1mg/L；绿苗分化培养基：基本培养基中添加激动素KT 2.0mg/L；试管苗生根培养基：基本培养基中添加生长素NAA 0.6mg/L；培养基在高压灭菌前用氢氧化钠和盐酸调整pH值至6.5；3)培养方法田间选取假俭草的嫩茎，去除叶鞘和叶片，经冲洗干净后剪成带有侧芽2cm长的段块，用质量比0.2％的洗衣粉浸泡20min，流水冲洗1h，在超净工作台上用75％的乙醇浸泡50s，0.2％升汞消毒15min，再用无菌水冲洗4-5次；经表面消毒的茎段先接种到侧芽生长培养基上，侧芽在愈伤组织诱导培养基上产生愈伤组织，第28天时从中选择黄色、紧密、颗粒状愈伤组织进行继代增殖，愈伤组织继代培养2次，然后移到绿苗分化培养基上，4-5周后再生植株转到试管苗生根培养基中，再生植株在试管苗生根培养基中生根，2周后试管植株移栽到盆钵和田间；在离体培养过程中培养室温度为25±1℃，愈伤组织诱导和增殖培养在散射光下进行，绿苗分化、生长和生根培养在光照条件下进行。