聚合酶标记抗体的制备方法

摘要

本发明属于酶免疫技术领域，具体涉及一种聚合酶标记抗体的制备方法。聚合酶标记抗体的制备方法，其特征在于它包括如下步骤：在非离子表面活性剂存在下，使可溶性辣根过氧化物酶(HRP)胶束化，以NaIO₄先将HRP表面的糖分子氧化成醛基，然后利用HRP上的氨基与醛基发生缩合反应生成聚合酶(Poly－HRP)，再利用聚合酶上过量的醛基与IgG上的氨基相结合，生成可溶性的Poly－HRP－IgG，用NaBH₄将所生成的不饱和键还原后，生成稳定的聚合酶标记抗体(Poly－HRP－IgG)。该方法制备过程简单，制备的聚合酶标记抗体在应用时具有较快的显色速度，较高的灵敏度和更好的贮存稳定性。

主权项

1.聚合酶标记抗体的制备方法，其特征在于它包括如下步骤：1)氧化反应：取8mg辣根过氧化物酶，加8mmol NaIO4，反应20分钟，得到含醛基的HRP；2)聚合形成多聚酶：步骤1)得到的含醛基的HRP中加入2ml质量浓度为3％的非离子表面活性剂，再用1M Na2CO3-NaHCO3溶液调pH至8.8-9.2，然后4℃旋转反应过夜得多聚酶；3)纯化：步骤2)得到的多聚酶用10mM磷酸盐生理缓冲液透析换液3次，得透析物；4)连接IgG：取出步骤3)得到的透析物，加入IgG 0.27mg；5)用10ul浓度为1M的Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液调PH至8.3-8.7，旋转反应4小时；6)还原稳定化：加入120ul浓度为5mg/ml NaHB4，摇匀，室温静置还原90分钟；7)纯化：10mM磷酸盐生理缓冲液透析，换液3次，取出透析物，得聚合酶标记抗体。