自身抗体的互补式亲和层析纯化方法

摘要

自身抗体的互补式亲和层析纯化方法，能高度特异性地从人血清或免疫动物血清中提取纯化抗组织细胞自身抗原的多克隆抗体。对于组织细胞中因组成成分较多而不适宜于用基因工程表达和单克隆抗体亲和层析获得的自身抗原，其对应的自身抗体也种类众多，适合于用本方案进行多克隆抗体的纯化。所获得的高度特异性自身抗体可以作为抗体标准品，用来制作基于各类免疫学实验方法的自身抗体定量检测试剂盒，对自身免疫性疾病的诊断、治疗、预后和疗效观察具有重要价值。在纯化抗人精子抗体的实践中，该方法科学可行，耗费低廉，所得免源性抗人精子多克隆抗体具有极高的纯度和特异性。

主权项

1.一种自身抗体的互补式亲和层析纯化方法，其特征在于该方法为：首先用互补式亲和层析法纯化制备自身抗原：11)收集人的目的组织细胞，用NP-40萃取细胞膜抗原，再用超声波粉碎组织细胞，超速离心后取上清液，作为粗制抗原A液，12)用目的组织细胞免疫实验动物，取抗血清，经盐析法粗提γ免疫球蛋白，称免疫血清IgG；同时取未被免疫的该种实验动物的混合血清，经盐析法粗提γ免疫球蛋白，称未免疫血清IgG；用正常人混合全血清免疫实验动物，取抗血清，同样经盐析法粗提γ免疫球蛋白，称抗人全血清IgG，13)用Sepharose-4B琼脂糖凝胶分别与上述的免疫血清IgG、未免疫血清IgG和抗人全血清IgG偶联成免疫亲和层析A柱、B柱和C柱，14)取粗制抗原A液过亲和层析A柱，收集与A柱上IgG结合的抗原物质，浓缩后为粗制抗原B液；再取粗制抗原B液过亲和层析B柱，收集不与B柱上IgG结合的抗原物质，浓缩后为粗制抗原C液；最后取粗制抗原C液过亲和层析C柱，收集不与C柱上IgG结合的抗原物质，浓缩后为精制抗原液；然后用互补式亲和层析法纯化制备抗自身抗原的多克隆抗体：21)收集自身抗体阳性的病人血清或者用自身抗原免疫接种的实验动物的抗血清；用盐析法及DEAE52纤维素柱纯化IgG型和IgA型免疫球蛋白，并分别称为粗制IgG型抗体D液和粗制IgA型抗体D液，22)收集不含目的自身抗原的健康人的混合血清；收集不含目的抗原的人的组织细胞，并制备成组织细胞裂解液，23)用Sepharose-4B琼脂糖凝胶分别与上述的精制抗原液、不含目的抗原的健康人混合血清以及不含目的抗原的人组织细胞裂解液偶联成亲和层析D柱、E柱和F柱，24)取粗制IgG型或IgA型抗体D液过亲和层析D柱，收集与D柱上自身抗原相结合的抗体物质，浓缩后为粗制IgG型或IgA型抗体E液；后者过亲和层析E柱，收集不与E柱上蛋白相结合的抗体物质，浓缩后为粗制IgG型或IgA型抗体F液；F液再过亲和层析F柱，收集不与F柱上蛋白相结合的抗体物质，浓缩后为精制自身抗体液IgG型或者IgA型。