由纳米粒子将含有基因治疗片段的质粒载体导入细胞的方法

摘要

本发明涉及一种由纳米粒子将含有基因治疗片段的质粒载体导入细胞的方法。其过程包括：选择生长状态良好的细胞接种于细胞培养板培养；将无机盐纳米粒子悬液离心、弃上清后，将沉淀溶于500ul去离子水中；吸取2ul质粒溶于98ul去离子水；取含有5～10mg纳米粒子的溶液与含有4～15ug质粒的溶液配成总体积为1ml的悬液摇匀，使纳米粒子与质粒充分结合；将充分结合的悬液离心、弃上清，在沉淀中加入离子水混匀后加入细胞培养板中，加入新鲜培养液，培养，使与质粒充分结合的纳米粒子转染入细胞；最后通过显微镜观察转染效果。

主权项

1.一种由纳米粒子将含有基因治疗片段的质粒载体导入细胞的方法，其特征在于：a) 生长状态良好的细胞，隔夜培养，0.25％的胰酶消化，细胞计数后取1X106的细胞接种12孔板，加入新鲜培养基DMEM，在37℃、5％CO2 条件下培养，24小时后换液一次，转染前24h将适量细胞重新接种于12孔中细胞培养板的各孔，贴壁细胞在长满底面积80％时进行转染；b)取无机盐纳米粒子净含量为20～30mg的悬液，于4摄氏度，8500rpm离心1 5分钟，弃上清，将沉淀溶于500ul去离子水中，分装成5份，每份120ul；c)吸取2ul质粒溶于98ul去离子水，分光光度计测出质粒载体浓度1084ug/ml，纯度1.65；d)将b)步骤中获得的纳米粒子含量为5～10mg的溶液与c)步骤中获得的质粒含量为4～15ug的溶液配成总体积为1ml的悬液，于4摄氏度，96rpm，4小时摇匀，使纳米粒子与质粒充分结合；e)取摇匀后的纳米粒子悬液1ml于4摄氏度，8500rpm，离心15分钟，弃上清，沉淀中加入200ul去离子水，混匀，均匀加入12孔中细胞培养板中的4孔，轻摇使之混合均匀，再于每孔中加入2ml新鲜培养液，在37℃、5％CO2条件下过夜培养，使与质粒充分结合的纳米粒子转染入细胞；f)24小时后于显微镜下观察，含有基因治疗片段的质粒载体被导入细胞。