藻红胆素荧光蛋白的制备方法

摘要

本发明涉及藻红胆素荧光蛋白的制备方法，包括以下步骤：1)将apo－CPC的基因或apo－APC的基因克隆于表达载体中；2)将重组的表达载体转入到大肠杆菌中，挑取单克隆，得到大肠杆菌工程菌；3)表达此工程菌，将所得的工程菌于磷酸缓冲液中破碎、离心，透析，得到apo－CPC或apo－APC溶液；4)将PEB的二甲亚砜溶液按PEB与apo－CPC或apo－APC摩尔比1∶1地加入到apo－CPC或apo－APC溶液中；5)提纯PEB－CPC或PEB－APC粗产物，即得。本发明有利于实现工业化生产，具有更大的开发价值，为藻胆蛋白类色素蛋白质荧光材料应用于食品、医学、化妆品、生物材料等领域奠定了基础。

主权项

1.藻红胆素荧光蛋白的制备方法，其特征在于包括有以下步骤：1)采用基因工程方法，将apo-CPC的基因：cpcA、cpcB或apo-APC的基因：apcA分别克隆于表达载体中；2)将此重组的表达载体分别转入到大肠杆菌中，挑取单克隆，从而得到相应的能表达apo-CPC或apo-APC的大肠杆菌工程菌；3)通过发酵工程按需要大量培养此大肠杆菌工程菌，将所得的大肠杆菌工程菌于磷酸缓冲液中破碎、离心，所得上清液对pH7.5磷酸缓冲液透析，得到apo-CPC或apo-APC溶液；4)将PEB的二甲亚砜溶液按PEB与apo-CPC或apo-APC溶液摩尔比为1∶1地加入到步骤3)得到的apo-CPC或apo-APC溶液中，在反应温度20～40℃，pH7.5～8.5条件下反应，得到PEB-CPC或PEB-APC粗产物；5)采用生物工程提纯技术提纯PEB-CPC或PEB-APC粗产物，即得到高荧光的PEB-CPC或PEB-APC。