纳米固定化酶体外定向生产TF2A粗提物的方法

摘要

本发明公开了一种纳米固定化酶体外定向生产TF2A粗提物的方法，首先制备茶多酚氧化酶粗提液，粗提液中酶活力为0.32～0.34；再依次进行纳米固定化酶制备和茶多酚的定向氧化这两大步骤。测得本发明的方法生产的茶黄素混合液中四种主要茶黄素单体的浓度之和为64.5％，TF2A含量为43.3％。本发明的制备方法中，纳米固定化酶的制备方法简单，氧化后易回收，所用材料成本低；氧化条件简单，氧化时间短；制备的产品具有良好的定向性，含量较高。

主权项

1.一种纳米固定化酶体外定向生产茶黄素-3-没食子酸酯粗提物的方法，包括首先制备茶多酚氧化酶粗提液，其特征在于所述方法还依次进行以下步骤：1)、纳米固定化酶制备：按照0.70～0.75g/70～75ml的比例在上述茶多酚氧化酶粗提液中加入纳米碳酸钙粉末，在2～8℃下搅拌1.5～2小时，粗提液中酶活力为0.32～0.34；将上述混和物全部放入离心容器中，3500～4500转，2～8℃离心15～20分钟，弃上清；再用pH5.6的柠檬酸磷酸缓冲液洗涤2～3次，所得沉淀物即为纳米固定化酶；2)、茶多酚的定向氧化：取儿茶素含量大于98％、表没食子酸儿茶素没食子酸酯含量大于45％的茶多酚，用pH5.6的柠檬酸磷酸缓冲液配制成浓度为0.4～0.6mg/ml的溶液，并用1mol/L的HCl调节所述溶液的pH至4.9～5.1，形成茶多酚溶液；将上述步骤1)中所得的纳米固定化酶按照重量体积比为0.008～0.012g/0.8～1.2ml的比例悬浮于pH5.6的柠檬酸磷酸缓冲液中，充分搅拌使其悬浮均匀，形成纳米固定化酶悬浮液；在所述茶多酚溶液中加入纳米固定化酶悬浮液形成混合液，所述纳米固定化酶悬浮液与茶多酚溶液的体积比0.25～0.3/3.8～4.2；将所述混合液于35-38℃的温度下，加热10～12分钟；将上述加热后的混合液倒入离心容器，7500～8500转2～8℃离心15～20分钟，收集上清液，进行萃取、真空干燥。