一种从蛇毒中提取单一成份降纤酶的方法

摘要

一种从蛇毒中提取具有降纤溶栓作用的降纤酶的方法，属于医药技术领域。步骤包括如下：蛇毒经浸泡溶解、离心；上清液经亲和柱层析；洗脱液直接流经葡聚糖凝胶G25脱盐层析；含有效成分的洗脱液经包埋、浓缩；浓缩样品再经分子筛层析，即可得到单一成分的降纤酶。本方法具有适合规模化生产、操作简便、生产周期短、产品纯度高等特点。

主权项

1、从蛇毒中提取单一成份降纤酶的方法，步骤包括：(1)蛇毒用缓冲液浸泡、溶解过夜，离心去除沉淀，得上清液；(2)蛇毒上清液经苯甲脒琼脂糖凝胶亲和柱层析，上样结束后，用pH8.5～9.5含2.0～2.5M NaCL的Tris-HCL缓冲液I进行洗脱，至核酸蛋白检测仪读数达到基线后，再用pH8.5～9.5含0.1～0.5M NaCL和0.1～0.2M苯甲脒盐酸盐的Tris-HCL缓冲液II洗脱，核酸蛋白检测仪检测样品峰，收集得降纤酶粗提液；(3)降纤酶粗提液直接流经与亲和层析柱串联在一起的脱盐柱，去除苯甲脒盐酸盐；(4)去除苯甲脒酸盐的降纤酶粗提液用聚乙二醇20000包埋、浓缩，得降纤酶粗提液的浓缩液；(5)降纤酶粗提液的浓缩液经丙烯葡聚糖凝胶分子筛柱层析，即得单一组份降纤酶；上述提取分离的全过程均在3～6℃的低温层析冷柜或冷室中进行。