一种海水鲆鲽鱼类受精卵的组织切片方法

摘要

本发明是一种适用于海水鲆鲽鱼类受精卵的一套胚胎定位包埋连续切片方法，涉及显微组织切片技术。本发明针对海水鲆鲽鱼类受精卵为多卵黄浮性卵、卵膜韧性强以及卵周隙狭小的特点，探索建立了一套针对海水鲆鲽鱼类受精卵的有效的组织切片方法。(1)Bouin’s固定液固定多卵黄浮性卵及处理时间的优化。(2)用解剖针在植物极方向戳破卵膜解决因卵周隙狭小不能剥离卵膜的难点。(3)采用热琼脂直接包埋法定位胚胎。本发明方法简单有效，容易掌握，不但适用于海水鲆鲽鱼类受精卵组织切片，也适用于同属浮性卵、多卵黄的其它海水鱼类卵的组织切片。

主权项

1、一种海水鲆鲽鱼类受精卵的组织切片方法，其步骤如下：1)材料固定：鱼卵经Bouin’s固定液固定6～12小时后，用70％乙醇反复冲洗，并更换数次乙醇，以洗去固定液，在70％乙醇中保存、备用；2)材料预处理：用70％乙醇冲洗鱼卵后，用解剖针在鱼卵的植物极方向戳破卵膜；3)琼脂定位包埋：将鱼卵置于载玻片上，滴上温热琼脂胶，自然冷却成琼脂块，在解剖镜下用解剖针调整好鱼卵的位置，琼脂浓度1～2％；4)脱水处理：经70％、80％、90％、95％、100％梯度酒精脱水处理，每步处理30～60min，95％乙醇中加入伊红将鱼卵染成红色，以方便后期切片时观察其位置；5)透明处理：用松油醇对琼脂块进行透明处理，将琼脂块浸没于松油醇中，处理时间4小时以上；6)透蜡处理：琼脂块经松油醇与石蜡等体积混液处理4小时以上，然后放入石蜡中进行渗透；7)石蜡包埋：透蜡完成后即可进行包埋，做成石蜡块；8)进行组织切片。