主权项 |
1、一种基于基因组RAPD分析的豇豆品种分子鉴定方法,它包括如下步骤:(1)、提取现有各豇豆品种基因组的DNA;(2)、将所提取豇豆品种基因组的DNA分别进行聚合酶链式反应,得到随机扩增多态DNA产物;其中:聚合酶链式反应的引物为OPA03TTAGCGCCCC、OPA07CTACGCTCAC、OPC01TCCCAGCAGA、OPC02GTGAGGCGTC、OPC06CCAGAACGGA、OPC07GTCCCGACGA、OPC08TTTGGGTGCC、OPC09CTCACCGTCC、OPC11AAAGCTGCGG、OPI02AGCCGTTCAG、OPJ03AGCACCTCGT、OPJ09ACGGCACGCA、OPP17AAGGCACGAG、OPS07TCCGATGCTG、OPS10ACCGTTCCAG、OPS18CTGGCGAACT、OPS19GAGTCAGCAG、OPS20TCTGGACGGA、OPU10ACCTCGGCAC、OPU11AGACCCAGAG、OPU17ACCTGGGGAG、OPU18GAGGTCCACA、OPU20ACAGCCCCCA;(3)、用1.0%的琼脂糖分别对随机扩增多态DNA产物进行电泳分离,EB直接加在凝胶中,总上样量为8μl,其中4μl扩增产物,另加40%蔗糖溶液2μl和0.1%溴酚蓝2μl,在80V下恒压电泳1.5h;(4)、电泳结束后在紫外光检测仪上照相,分别得到随机扩增多态DNA标准图谱;(5)、选清晰随机扩增多态DNA图谱采用“0-1”系统记录谱带,将有带的赋值为1,无带的赋值为0;读取每个材料在不同引物扩增产物电泳谱带的数据,建立数据库;(6)、按以不加权成对算术平均值方法进行聚类分析,得到系统聚类树;(7)、将所需要鉴定的豇豆品种按上述步骤进行分析,得到所需要鉴定豇豆品种的随机扩增多态DNA图谱,将此随机扩增多态DNA图谱与标样图谱进行比较判定,得到分析鉴定结果。 |