土豆磷酸化酶的分离提取方法

摘要

本发明公开了一种土豆磷酸化酶的分离提取方法，该方法以土豆为原料，通过硫酸铵分级盐析法提取具有较高比活力的土豆磷酸化酶。本发明的方法工艺简单，操作方便，造价低廉，易于从土豆中分离纯化制得具有较高比活力的土豆磷酸化酶。该土豆磷酸化酶可以用于高效合成结构可控的直链淀粉多糖。本发明制备的土豆磷酸化酶可广泛应用于医药、食品、保健、生物、农业等领域。

主权项

1、一种土豆磷酸化酶的分离提取方法，其特征在于包括如下步骤：(1)将450～800克土豆去皮、切块，搅碎成土豆汁；在土豆汁中加入亚硫酸钠溶液，使土豆汁混合溶液中亚硫酸钠的浓度为0.1～0.3克/升；高速冷冻离心土豆汁，除去白色沉淀物A即土豆淀粉，调节上层离心清液I的pH至6.0～8.0；(2)加热离心清液I至50～70℃，恒温搅拌30～90分钟，高速冷冻离心，除去白色沉淀物B即失活的淀粉酶，得到离心清液II；(3)在离心清液II中加入硫酸铵溶液，调节溶液密度至1.05～1.10克/毫升，于0～4℃静置2～6小时后，高速冷冻离心，除去白色沉淀物C即杂蛋白，得到离心清液III；(4)在离心清液III中加入硫酸铵溶液，调节溶液密度至1.15～1.25克/毫升，于0～4℃静置6～12小时后，高速冷冻离心，收集白色沉淀物D即粗土豆磷酸化酶；(5)将步骤(4)收集的粗土豆磷酸化酶溶于15～25毫升缓冲溶液中，高速冷冻离心，除去不溶性杂质，制得土豆磷酸化酶液。