一种用于蛋白质末端肽段富集与测序的方法和试剂盒

摘要

本发明提供了一种用于蛋白质末端肽段的富集与测序的方法和试剂盒。该方法涉及蛋白质末端氨基的修饰、还原烷基化和胰蛋白酶酶切、末端肽段的色谱富集与质谱测序，通过对酶切肽段混合物中末端肽段的富集与测序，获得蛋白质的末端序列信息以进行蛋白质的鉴定及末端分析，主要用于蛋白质组研究。本发明还描述了便于该方法实施的试剂盒。

主权项

1.一种用于蛋白质末端肽段的富集与测序的方法，该方法包括：(1)对蛋白质的末端氨基进行化学修饰(2)用还原剂打开蛋白质分子中的二硫键，破坏其高级结构；用烷基化试剂封闭巯基，防止其重新形成二硫键；(3)用化学消化或酶消化法对蛋白质进行消化，产生适于质谱分析的肽段；用试剂对酶切肽段的侧链氨基进行保护；(4)用阳离子交换色谱柱分离富集蛋白质末端肽段；(5)用质谱分析技术分析蛋白质末端肽段，使其裂解产生碎片离子的质谱图；其特征在于所述步骤(1)的处理方法为：(a)用磺酸衍生物对蛋白质的末端氨基进行化学修饰，使其带上酸性基团；(b)用一种或多种含游离氨基的化学试剂，对蛋白质的修饰反应进行终止。