原绿球藻的显微定量方法

摘要

原绿球藻的显微定量方法，涉及一种海洋浮游植物的定量方法，尤其是涉及一种采用基于时间序列观察、自动成像和数字化分析的落式荧光显微镜法对海洋浮游植物原绿球藻的定量方法。提供一利原绿球藻计数方法，其步骤为样品预过滤、固定、双链DNA荧光染料染色、过滤并制片；用配有红敏的电子耦合组件照相机和汞灯的落式荧光显微镜进行观察，以2组不同的荧光激发块对同一视野蓝细菌和染料图像观察和拍照，显微聚焦后进行蓝细菌和双链DNA荧光染料图像时间序列上的获取图像；对图像中的细胞识别和分析，得新的二元数字化图像；计算：由双链DNA荧光染料图像、最初的蓝细菌图像、平台期的蓝细菌图像和二元数字化图像得原绿球藻的丰度。

主权项

1、原绿球藻的显微定量方法，其特征在于其步骤为：1)将所采样品预过滤、固定、双链DNA荧光染料染色、过滤并制片；2)用配有红敏的电子耦合组件照相机和汞灯的落式荧光显微镜进行观察，以2组不同的荧光激发块分别对同一视野的蓝细菌和双链DNA荧光染料图像进行观察和拍照，显微聚焦后，进行蓝细菌和双链DNA荧光染料图像时间序列上的获取图像；3)对图像中的细胞进行识别和分析，并获得新的二元数字化图像；4)计算：假设一个视野下，分别获得双链DNA荧光染料图像a、最初的蓝细菌图像b和平台期的蓝细菌图像c，并分别获得相应的二元数字化图像d、e和f，那么原绿球藻的丰度＝BooleanAND[(d)，(f)]-BooleanAND[(d)，(e)]，其中“BooleanAND”指“逻辑运算与”，所说的聚焦后获得的第一张蓝细菌图像是以聚球藻为主的具强荧光的较大的藻类细胞。