一种分离嗜温硫氧化硫化杆菌的方法

摘要

一种分离嗜温硫氧化硫化杆菌(Sulfobacillus thermosulfidooxidans)的方法。将待分离样品在70－80℃下预处理，再接入培养基1，在50－55℃和55－60℃中静置处理，然后转接到培养基2中，在50－55℃中连续震荡富集三次，得到富集物3，再在相同温度下进行连续四次震荡稀释分离，最后得到稀释物4即纯化的S.thermosulfidooxidans菌株。本发明既突破了平板分离法的限制，又有效地克服了一般稀释法难以分离中度嗜温浸矿菌的难点，为此类菌的分离纯化找到了一条快速有效的途径。该方法主要适用于能产生芽孢的革兰氏阳性菌，重点针对嗜温硫氧化硫化杆菌。

主权项

1.一种分离嗜温硫氧化硫化杆菌的方法，其特征在于：首先将样品静置水浴中，逐步升温到70～80℃，保持该温度50～72小时，然后按6％的接种量将该样品加到pH1.5～1.8的培养基1中，接种物移入50～55℃水浴，静置24～48小时，再转到55～60℃水浴，继续静置12～24小时，在经过连续静置处理的接种物中，按培养基2的配方补加各种营养物质，保持pH1.5～1.8，50～55℃下震荡培养150～168小时，得到富集物1；将富集物1按2％的接种量，转接到培养基2中，在相同条件下震荡培养约100～120小时，此为富集物2；按相同方法，再次富集约90小时，得到富集物3；将富集物3按10-8、10-9、1-10稀释度，分别接入培养基3中，在50～55℃下进行震荡稀释分离，用重铬酸钾法滴定亚铁含量，直接计数法计数活细胞数，当亚铁氧化率达90％以上，菌数达1×107/ml时，停止培养，选择稀释倍数最高的培养物作为稀释物1；如此反复稀释分离四次，最后得到稀释物4即纯化的S.thermosulfidooxidans菌株；所述培养基1为：(NH4)2SO4 0.1g/l，MgSO4·7H2O 0.3g/l，KH2PO4 0.1g/l，KCl 0.05g/l，FeSO4·7H2O 10mM，pH1.5～1.8；所述培养基2为：(NH4)2SO40.4g/l，MgSO4·7SO40.5g/l，K2HPO4 0.2g/l，KCl 0.1g/l，FeSO4·7H2O 50mM，yeast extract 0.1g/l，pH1.5～1.8；所述培养基3为：(NH4)2SO4 1.0g/l，MgSO4·7H2O 1.0g/l，K2HPO4 0.2g/l，FeSO4·7H2O 100mM，yeast extract 0.2g/l，ZnSO4·7H2O3 100mg/l，CoSO4·7H4O 30mg/l，CuSO4·5H2O 300mg/l，MnSO4·4H2O 60mg/l，pH1.5～1.8。