pET15b－PEP－1－SOD1质粒及构建、PEP－1－SOD1融合蛋白及表达

摘要

本发明提出了pET15b－PEP－1－SOD1质粒及构建、PEP－1－SOD1融合蛋白及表达。具体如下：合成两端分别加有Xho I和BamH I酶切位点的上下游引物，用PCR方法以pBluescript II SK－SOD1质粒为模板，以上下游引物进行PCR扩增；将扩增的SOD1 cDNA与dATP反应加“A”，纯化后与pGEM－T Easy载体连接；将pGEM－T Easy－SOD1质粒和pET15b质粒分别用Xho I和BamH I双酶切，回收SOD1片段和线性化的pET15b片段并纯化，两者在T4 DNA连接酶作用下发生连接得pET15b－SOD1质粒；把pET15b－SOD1用NdeI、Xho I双酶切，回收线性化的pET15b－SOD1片段，将编码PEP－1的两条寡核苷酸链复性为双链，然后与Nde I、Xho I双酶切消化、纯化回收后的pET15b－SOD1得pET15b－PEP－1－SOD1质粒。融合蛋白的表达如下：用pET15b－PEP－1－SOD1转化感受态E.coliBL21(DE3)，然后在培养基中发酵；用冰浴超声破菌，收集上清液，纯化融合蛋白，脱盐、除菌后，用Eppendorf管分装，－80℃保存。

主权项

1、pET15b-PEP-1-SOD1质粒，采用pET15b为表达载体，PEP-1-SOD1基因见序列表1中的核苷酸序列。