经培养的胰腺细胞及其培养方法和用途

摘要

本发明涉及从糖尿病动物的胰腺组织中分离、培养胰岛干细胞和将胰岛干细胞诱导分化为可分泌胰岛素的胰腺内分泌细胞的方法。从糖尿病动物胰腺组织中分离胰岛细胞团，然后a)将从糖尿病动物胰腺组织中分离出的胰岛细胞团加入装有培养基A的培养皿中，培养2－5天；b)将悬浮的胰岛细胞团接种于含有培养基B的培养皿中培养；c)经过6－20天，生长出星形胰岛干细胞；d)在所述星形胰岛干细胞将汇合时传代，至到长满传代后的培养皿，得到胰岛干细胞。将胰岛干细胞接种于含有培养基C的培养皿中，培养2－5天；将培养基C更换为培养基D，但仍然在培养皿中，培养大约4－15天，得到可分泌胰岛素的胰腺内分泌细胞。

主权项

1.一种检测糖尿病动物胰腺组织中胰腺干细胞的方法，包括：a)免疫组化检测，包括：胰腺组织固定，制作石蜡包埋切片，封闭后接触一抗抗体，接触二抗抗体，然后封片观察，其中所述一抗抗体包括兔抗巢蛋白抗体；b)RT-PCR分析，包括提取总RNA，通过逆转录形成cDNA，然后利用引物进行PCR扩增；c)根据步骤a)和b)的结果确定糖尿病动物胰腺组织中是否存在胰腺干细胞。