| 发明名称 |
八棱丝瓜蛋白1的快速分离纯化及其晶体生长技术 |
| 摘要 |
本发明涉及生物化学领域，特别是涉及到生物化学中一种核糖体失活蛋白的八棱丝瓜蛋白1的快速分离纯化及其晶体生长技术。八棱丝瓜蛋白1(Luffaculin 1)的快速分离纯化技术是经缓冲液浸泡、匀浆、抽提后，用2次Sp－SepharoseFast Flow强阳离子柱梯度洗脱，便可获得高纯度的八棱丝瓜蛋白1；八棱丝瓜蛋白1已在磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液和Tris－HCl缓冲液中，以聚乙二醇为沉淀剂长出可供X－射线衍射的单晶体。本发明省却了许多人工繁琐操作，省却了透析的繁琐步骤，所得出的八棱丝瓜蛋白1的纯度高。 |
| 申请公布号 |
CN1958601A |
申请公布日期 |
2007.05.09 |
| 申请号 |
CN200510114000.5 |
申请日期 |
2005.11.01 |
| 申请人 |
中国科学院福建物质结构研究所 |
发明人 |
陈明晃 |
| 分类号 |
C07K1/14(2006.01);C07K14/415(2006.01);A61K38/56(2006.01);A61P31/12(2006.01);A61P35/00(2006.01) |
主分类号 |
C07K1/14(2006.01) |
| 代理机构 |
|
代理人 |
|
| 主权项 |
1.一种八棱丝瓜蛋白1的快速分离纯化技术，包括匀浆、调酸和两次强阳离子柱梯度洗脱，其特征在于，通过包括以下四个步骤快速分离纯化得到八棱丝瓜蛋白1：(1)八棱丝瓜种子用pH4.5 10mM醋酸缓冲液浸泡6个小时后，直接进行匀浆；(2)匀浆液用50％的冰醋酸调pH 3.5-4.0，然后在4℃条件下，16000×g离心30’，收集上清液；(3)加样到pH4.5，20mM醋酸缓冲液平衡的Sp-Sepharose Fast Flow柱上，280nM实时检测，用pH4.5，20mM醋酸缓冲液洗至基线，再用pH6.5，20mM磷酸盐缓冲液洗至基线，然后用0-0.6M NaCl在pH 6.5，20mM磷酸盐缓冲液进行梯度洗脱，收集第1峰；(4)合并峰1，用50％的冰醋酸调pH4.0；同时加2倍体积的pH4.5，20mM醋酸缓冲液，再加样到用pH4.5，20mM醋酸缓冲液平衡的Sp-Sepharose Fast Flow柱上，280nM实时检测，用pH4.5，20mM醋酸缓冲液洗至基线，再用pH7.5，20mM磷酸盐缓冲液洗至基线，然后用0-1M NaCl在pH7.5，20mM磷酸盐缓冲液中进行梯度洗脱，收集主要的峰，该峰就是高度纯化的八棱丝瓜蛋白1。 |
| 地址 |
350002福建省福州市杨桥西路155号 |
