一种基因载体的制备方法及应用

摘要

本发明涉及医学领域用的材料，尤其是一种基因载体材料的制备方法，其特征在于：将Ca(NO₃)₂和(NH₄)H₂PO₄溶液以体积比5∶3的比例在1500转/min的转速下混合，再将得到的沉淀物放入高压釜中，在200℃、200mv、200转/分钟的转速下处理4小时，得到羟基磷灰石纳米颗粒；它的结构与骨和牙齿相似，是具有良好生物相容性的生物陶瓷材料，可根据应用的要求制备成所需要的几何形态，具有大的表面能，增强其携带DNA的能力，解决了基因载体转导率低、药物易从脂质体中渗漏和难制备等问题，保证了在使用过程中的分散稳定性，满足了基因治病的有效性和安全性。

主权项

1、一种基因载体的制备方法，其特征在于：(1)羟基磷灰石纳米颗粒制备：将分析纯Ca(NO3)2和(NH4)H2PO4分别溶于去离子水中，配成1mol/L的溶液，将Ca(NO3)2和(NH4)H2PO4溶液以体积比5∶3的比例在1500转/min的转速下混合，并用NaOH调节溶液的pH值在11～12范围，搅拌10小时后，老化24小时；再将得到的沉淀物放入高压釜中，在200℃、200mv、200转/分钟的转速下处理4小时，再经清洗、过滤、干燥得到羟基磷灰石纳米颗粒；(2)羟基磷灰石纳米颗粒生物相容性实验：将SGC-7901细胞接种于96孔组织培养板；加入不同浓度的纳米颗粒混悬液，继续培养48h后进行MTT测定，比色法确定有活力的细胞数，方差分析方法采用SPSS9.0统计软件进行；(3)羟基磷灰石纳米颗粒与DNA结合实验：取琼脂糖粉制凝胶，将羟基磷灰石纳米颗粒混悬液稀释，加PEGFP-N1混均10min，静置30min，离心；以PEGFP-N11μg为对照，取上清液琼脂糖凝胶电泳检测；取羟基磷灰石纳米颗粒混悬液，并将其调至不同的pH值，分别放入eppendorf管与PEGFP-N1混合，混均，室温静置30min，离心；取上清液琼脂糖凝胶电泳检测；(4)纳米颗粒一DNA复合体体外转染细胞实验：将SGC一7901细胞接种于培养皿加入配有小牛血清的DMEM培养基培养24h后，在培养皿加入纳米颗粒DNA复合体；以单纯PEGFP-N1表达质粒DNA以及与脂质体结合的PEGFP-N1表达质粒DNA作为对照；混合培养分别于24，48，72h后荧光显微镜下观察结果。