一种利用不对称体细胞杂交技术创建小麦渐渗系的方法

摘要

本发明公开一种γ-射线和UV诱导的染色体小片段向小麦渐渗的方法，由双亲胚性愈伤组织和悬浮细胞系的诱导及筛选；受体和供体原生质体的游离、UV及γ-射线处理供体原生质体；受体与供体原生质体的融合及培养；异源染色体小片段及DNA片段的鉴定及定位组成。利用本发明的方法可以获得转入不同异源植物染色体小片段和DNA的大量的耐盐、抗病、优质的体细胞杂种新种质、新品系和新品种。所创造的这些新材料可有效地丰富小麦的遗传变异和拓宽小麦的遗传多样性；用于小麦及异源遗传物质的基因功能及表达调控研究；用于小麦基因组进化的遗传学和表观遗传学研究；实现小麦产量和品质的遗传改良。

主权项

1.一种利用不对称体细胞杂交技术创建小麦渐渗系的方法，由以下步骤实现：1)双亲胚性愈伤组织和悬浮细胞系的诱导及筛选，获得培养细胞；2)适宜剂量的γ-射线处理供体原生质体；3)对以上的受体与供体原生质体进行融合及对融合产物进行培养；4)对含有异源染色体小片段及DNA片段的小麦渐渗系进行鉴定及定位，其特征在于：步骤1)所述双亲胚性愈伤组织和悬浮细胞系的诱导及筛选是指用小麦和与小麦有不同亲缘关系的不同野生和栽培的禾谷类作物的幼胚进行组织培养，从组织培养物中鉴别和筛选快速生长的颗粒型胚性愈伤组织，并且用其建立快速生长的胚性悬浮细胞系，可以产生大量原生质体；步骤2)所述适宜剂量的γ-射线处理供体原生质体是指培养细胞用于酶解分离原生质体指将小麦和供体培养细胞放入含纤维素酶和果胶酶的溶液中，于25℃下游离4小时；γ-射线处理供体原生质体是用400目不锈钢网过滤并离心收集原生质体；供体原生质体调成1×106/mL的密度，铺在直径1.5cm的玻璃培养皿中成薄层后用60Co-γ-射线照射，剂量为60Gy；剂量率为3.8Gy/min；步骤3)所述的对以上受体与供体原生质体进行融合及对融合产物进行培养和筛选，是指将受体及供体原生质体以1×106/ml的密度按1∶1的体积比混合均匀，用PEG法诱导融合，融合产物在P5培养基中培养和再生；当小苗长至5cm高时，转至壮苗培养基上壮苗；移栽至土成活并结实，获得杂种后代；步骤4)对杂种及后代的异源染色体小片段及DNA片段的鉴定及定位是指利用染色体核型、FISH和GISH及SSR技术相结合，对供体染色体小片段在小麦染色体及基因组中的分布和遗传规律进行定性及定量分析，鉴定小麦渐渗系。