抗乙肝病毒的鸡卵黄免疫球蛋白IgY及其分离方法

摘要

本发明公开了一种抗乙肝病毒的鸡卵黄免疫球蛋白IgY及其分离方法，分离方法是：(1)动物免疫；(2)分离纯化分离出鸡卵黄，用去离子水稀释，调节pH，加氯化钠放5～6小时，离心分离，弃去沉淀，向上清液中加入硫酸钠进行第一次盐析，离心分离出蛋白质沉淀，沉淀加去离子水至沉淀完全溶解为止，加入硫酸钠进行第二次盐析，离心分离，获得的蛋白质沉淀加去离子水至沉淀完全溶解为止，用凝胶柱过滤，洗脱出的蛋白质流分用紫外光度计监测，吸收波长为280nm，收集第一条谱带，经反透析浓缩，再透析除盐，得到一种抗乙肝病毒的鸡卵黄免疫球蛋白IgY，本发明的分离方法，工艺简单，成本低廉，所得样品质量较好。

主权项

1.一种抗乙肝病毒的鸡卵黄免疫球蛋白IgY，其特征是用下述方法分离制成：(1)动物免疫用乙肝病毒表面抗原HbsAg作为免疫原，对产蛋鸡进行免疫，收集鸡蛋于4℃储存；(2)分离纯化分离出鸡卵黄，用6～9倍体积的去离子水稀释，用0.1MHCl调节pH为4.5～5.5，加入氯化钠至0.1～0.2M，4℃放置5～6小时，在3500转/分下离心分离20～25分钟，弃去沉淀，向上清液中加入硫酸钠至质量百分浓度为18～20％，进行第一次盐析，在3500转/分，离心分离出蛋白质沉淀，沉淀加去离子水至沉淀完全溶解为止，加入硫酸钠至质量百分浓度为14～16％，进行第二次盐析，离心分离，获得的蛋白质沉淀加去离子水至沉淀完全溶解为止，将此溶液用2.5×100cm Sephadex G-150凝胶柱过滤，过滤之前，凝胶柱用25mM pH＝8的磷酸盐缓冲液预平衡，洗脱液流速200ml/小时，洗脱出的蛋白质流分用紫外光度计监测，吸收波长为280nm，收集第一条谱带，用聚乙二醇反透析浓缩，再透析除盐，得到一种抗乙肝病毒的鸡卵黄免疫球蛋白IgY。