一种双歧杆菌冻干粉的制备方法及其产品和用途

摘要

本发明涉及一种活性双歧杆菌冻干粉的制备方法及其产品，还涉该方法制备的双歧杆菌冻干粉在食品或饮料加工领域中的用途。本发明采用选育出的具有改善肠道菌群和提高免疫力的菌株，然后采用高密度培养、离心和冻干等方法生产出冻干菌粉，可将其作为食品添加剂，用于食品加工领域。双歧杆菌冻干粉含双歧杆菌活菌数大于10¹⁰cfu/克，水分含量小于5％。

主权项

1.一种双歧杆菌冻干粉的制备方法，其特征在于它包括如下步骤：(1)菌种活化：选用具有改善肠道菌群和提高免疫力的冻干菌种，将低温保存的菌种在室温下放置12-36小时，在无菌室无菌取液体培养基1加入玻管内，取菌物接种于液体培养基1和琼脂平板上，35-37℃条件下厌氧培养48～72小时，再连续活化三代，作为母培养物；(2)一级培养物的制备：将母培养物接入培养基1，接菌量为2～3％，在35～37℃条件下厌氧培养10-16个小时，作为一级培养物；(3)二级培养物的制备：将一级培养物接入培养基2，接菌量为2～3％，在35～37℃条件下厌氧培养10-14个小时，作为二级培养物；(4)增菌培养：将二级培养物接入培养基2，接菌量为2～3％，在温度为35～37℃，pH值在7.0～7.2，在搅拌条件下发酵8～12小时后得到双歧杆菌发酵液；(5)离心分离：在4℃条件下将上述双歧杆菌发酵液离心15～20分钟，取下层沉淀备用；(6)添加冻干保护剂冻干：将沉淀与冻干保护剂充分混合后，在真空度6Pa，冷冻温度-40℃，冻干时间为7～10小时的条件下冻干即可获得双歧杆菌冻干粉，其中冻干保护剂的用量为发酵液体积的1/4～1/2；其中，培养基1为TPY培养基，它是由胰酶水解酪蛋白12g、多胨3g、大豆蛋白胨5g、葡萄糖5g、低聚果糖5g、酵母粉5g、吐温-801g、肝浸液200mL、混合盐溶液10mL、西红柿汁100mL、L-半胱氨酸盐酸0.5g、蒸馏水675mL和混合维生素10mL组成；其中混合盐溶液是由K2HPO420.0g、MgCl2·6H2O5.0g、ZnSO4·7H2O2.5g、CaCl2 1.5g、FeCl30.5g和蒸馏水100mL组成；其中，混合维生素是由维生素B1100mg，维生素B2100mg，维生素B6100mg，泛酸钠10mg、生物素1mg和蒸馏水100mL组成；培养基2是由灭菌后的大豆蛋白胨16.67g、酪蛋白胨8.33g、乳糖5.0～10.0g、酵母浸提物5.0g、L-半胱氨酸盐酸0.5g、低聚糖5～7g、吐温-80 1.0g、混合盐溶液5mL、肝浸液或胡萝卜汁150mL、水845mL组成；其中混合盐溶液是由K2HPO420.0g、MgCl2·6H2O5.0g、ZnSO4·7H2O2.5g、CaCl21.5g、FeCl30.5g和蒸馏水100mL组成；冻干保护剂是由灭菌后的脱脂乳粉100g、甘油10g、低聚果糖25g、乳糖12.5g、胱氨酸1g、维生素C3g、水1000g组成。