从cDNA中回收非节段性负链RNA病毒的改进方法

摘要

本发明提供了产生单分子负链RNA病毒目的感染性、非节段性负链RNA病毒的方法，包括在用编码RNA聚合酶的表达载体瞬时转染的宿主细胞表达病毒的cDNA和必需病毒蛋白N、P和L。在另一种方法中，用病毒cDNA表达载体和编码RNA聚合酶、N蛋白、P蛋白和L蛋白的一种或多种载体转染宿主细胞后，将宿主细胞暴露于足以提高重组病毒回收率的有效热激条件下。在另一实施方式中，在病毒拯救开始后转移所述宿主细胞，与噬斑扩增细胞，一般是单层扩增细胞共培养，从该共培养物中回收组装的感染性、非节段性负链RNA病毒。本发明也提供用于产生单分子负链RNA病毒目的感染性、非节段性负链RNA病毒的组合物，和用上述方法和组合物产生的重组病毒和采用该重组病毒的免疫原性组合物和方法。在其它实施方式中，采用本发明方法和组合物产生生长或复制缺陷型非节段性负链RNA病毒和亚病毒颗粒。

主权项

1.一种产生单分子负链RNA病毒目的感染性、非节段性负链RNA病毒的方法，该方法包括以下步骤：(a)将含有编码非节段性负链RNA病毒的基因组或反义基因组的多核苷酸的病毒cDNA表达载体引入宿主细胞，该基因组或反义基因组操作性连接有表达控制序列以指导由所述cDNA表达载体合成病毒RNA转录物，其中所述宿主细胞表达N蛋白、P蛋白和L蛋白，并由瞬时转染的表达载体瞬时表达RNA聚合酶；和(b)从所述宿主细胞中回收组装的感染性、非节段性负链RNA病毒。