秋石斛兰优质种苗组织培养快速繁殖方法

摘要

本发明涉及秋石斛兰的优质种苗快速繁殖方法和所使用的培养基。秋石斛兰又称蝴蝶石斛，作为一种新型的高档切花品种，市场需求量较大。我国大陆近年来引进了不少秋石斛兰品种，但种苗生产主要靠分株，繁殖速度慢。已生产出的优质的秋石斛兰种苗，市场十分看好。本发明提供多种秋石斛兰原种和杂种的组织培养繁殖方法和所使用的培养基。通过丛生芽途径进行秋石斛兰优良品种的织培养获得大量性状稳定的试管苗，本发明提供的方法生产出的秋石斛兰种苗具有遗传稳定性高，出苗快，苗壮，种苗品质好、抗性强、生长良好等优势。

主权项

1、一种秋石斛兰种苗组织培养快速繁殖方法，以秋石斛兰种质的新芽为外植体，采用培养基进行丛生芽增殖并获得种苗，其特征在于该方法包括以下步骤：1).材料：秋石斛兰种质；2).外植体的消毒：取秋石斛兰当年生具5-6个节的嫩芽，去除叶片后，用水冲洗干净后剪成两段，在超净工作台上用70％的酒精浸泡1分钟，再用0.1％升汞溶液灭菌10分钟，无菌水冲洗5次后，用无菌吸水纸吸干，剪取2-3厘米带节的茎段和茎尖，接种到原球茎和丛生芽诱导培养基上；3).原球茎和丛生芽的诱导：原球茎和丛生芽的诱导培养基为MS+6-苄基嘌呤1-5毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15％椰子水，在培养温度26±2℃条件下，10天茎尖开始生长，20天茎段节上有新芽形成并生长，当6-苄基嘌呤为4-5毫克/升时新芽基部有原球茎产生，培养基含蔗糖30克/升，pH 5.5-5.8，琼脂0.7％；4).丛生芽增殖：将利用茎段和茎尖培养得到的丛生芽，剪去部分叶片转移到丛生芽增殖培养基：MS+6-苄基嘌呤1-5毫克/升+萘乙酸0.2-0.5毫克/升+15％椰子水，诱导原球茎和丛生芽形成，当6-苄基嘌呤浓度为1-2毫克/升时只有丛生芽形成，无原球茎形成，当6-苄基嘌呤浓度为3-5毫克/升时既有丛生芽，又有原球茎形成；5).生根壮苗培养：丛生芽增殖多代后，将丛生芽切割成单个芽，接种在1/2MS培养基+萘乙酸0.5-1.0毫克/升+香蕉汁100克/升+活性碳0.5克/升的生根壮苗培养基上进行生根壮苗培养，40天形成株高3-4厘米的完整植株；6).试管苗移栽：试管苗移栽时，在自然光照下炼苗5-10天，将秋石斛兰小苗从玻璃瓶中取出，洗净根部的培养基，在0.1％的高锰酸钾溶液中浸泡5分钟后晾干，以小塑料盆为栽培容器，以泥炭藓为栽培基质，保持通风和足够的湿度，冬季时采用温室种植，温度维持在15℃以上。