| 主权项 |
1.一用于在检体中侦测肠病毒存在与否之寡核 酸引子对,其中该对引子中第一引子包含下列任一 序列: 该对引子中第二引子包含下列任一序列: 其条件为,当第一引子包含序列SEQ ID NO:5,则第二引 子包含序列SEQ ID NO:8。 2.根据申请专利范围第1项之引子对,其包含选自包 括下列之群组之序列: 3.根据申请专利范围第1项之引子对,其为SEQ ID NO:5/ SEQ ID NO:8。 4.根据申请专利范围第3项之引子对,其有利于侦测 肠病毒71型(EV71)或克沙奇病毒A16(Cox A16)。 5.一合成性核酸序列,其包含任一选自下列群组 之序列: 其能够与肠病毒核酸之意义股或相关于该意义股 之核酸进行专一性杂交。 6.一种侦测肠病毒核酸在检体中存在与否的方法, 其包含下列步骤: (a)在一增幅方法中将该检体与根据申请专利范围 第1项之寡核酸引子对接触;及 (b)经由侦测增幅产物之存在与否而决定肠病毒之 存在与否。 7.根据申请专利范围第6项之方法,其中在步骤(a), 该检体于一增幅方法中同时与第二对根据申请专 利范围第1项之寡核酸引子接触,且该第二对引 子相异于第一对引子。 8.根据申请专利范围第7项之方法,其中在第二对引 子中的第一引子相异于第一对引子中的第一引子 。 9.根据申请专利范围第7项之方法,其中在第二对引 子中的第二引子相异于第一对引子中的第二引子 。 10.根据申请专利范围第7项之方法,其中在第二对 引子中的两个引子相异于第一对引子中的两个引 子。 11.根据申请专利范围第7项之方法,其中在步骤(a), 该检体于一增幅方法中同时与第三对根据申请专 利范围第1项之寡核酸引子接触,且该第三对引 子相异于第一对及第二对引子。 12.根据申请专利范围第6项之方法,其进而包含将 步骤(a)之产物于一增幅方法中同时与第二对根据 申请专利范围第1项之寡核酸引子接触,其中第 二对引子能用于增幅之序列,相等于使用第一对引 子在增幅方法中可获得之序列或在该可获得序列 范围之内。 13.根据申请专利范围第6项之方法,其中将被侦测 到的增幅产物进而与至少一根据申请专利范围第5 项之合成性核酸序列进行专一性杂交反应, 其条件为,当包含序列SEQ ID NO:8之第二引子不用于 增幅时,则该核酸序列应不包含任何序列SEQ ID Nos:12-15;当包含序列SEQ ID NO:5之第一引子不用于增 幅时,则该核酸序列应不包含任何序列SEQ ID Nos:9 -11。 14.根据申请专利范围第13项之方法,其中杂交反应 系于高度严格条件下进行。 15.一种侦测及监别检体中肠病毒71型的方法,其包 含: (a)在一增幅方法中将该检体与根据申请专利范围 第1项之寡核酸引子对接触,条件为第二引子系 包含序列SEQ ID NO:8; (b)经由侦测增幅产物之存在与否而决定肠病毒71 型之存在与否;及 (c)将所侦测到的增幅产物与至少一个包含序列SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:13之合成性核酸序列进行专一 性杂交反应。 16.根据申请专利范围第15项之方法,其中,在步骤(c) 中,增幅产物系与分别包含序列SEQ ID NO:12及SEQ ID NO :13之合成性核酸序列进行专一性杂交反应。 17.一种侦测及监别检体中克沙奇病毒A16型的方法, 其包含: (a)在一增幅方法中将该检体与根据申请专利范围 第1项之寡核酸引子对接触,条件为第二引子系 包含序列SEQ ID NO:8; (b)经由侦测增幅产物之存在与否而决定克沙奇病 毒A16型之存在与否;及 (c)将所侦测到的增幅产物与至少一个包含序列SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:15之合成性核酸序列进行专一 性杂交反应。 18.根据申请专利范围第17项之方法,其中,在步骤(c) 中,增幅产物系与分别包含序列SEQ ID NO:14及SEQ ID NO :15之合成性核酸序列进行专一性杂交反应。 19.一种侦测及监别检体中肠病毒71型及/或克沙奇 病毒A16型的方法,其包含: (a)在一增幅方法中将该检体与根据申请专利范围 第1项之寡核酸引子对接触,条件为第二引子系 包含序列SEQ ID NO:8; (b)经由侦测增幅产物之存在与否而决定肠病毒71 型及/或克沙奇病毒A16型之存在与否;及 (c)将所侦测到的增幅产物与至少一个包含序列SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:13之合成性核酸序列以及至少 一个包含序列SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:15之合成性核 酸序列进行专一性杂交反应。 20.根据申请专利范围第19项之方法,其中,在步骤(c) 中,增幅产物系与分别包含序列SEQ ID NO:12,SEQ ID NO: 13,SEQ ID NO:14及SEQ ID NO:15之合成性核酸序列进行 专一性杂交反应。 21.一种在检体中侦测肠病毒之套组,其包含至少一 对根据申请专利范围第1项之寡核酸引子,其条 件为,当第一引子包含序列SEQ ID NO:5,则第二引子包 含序列SEQ ID NO:8。 22.根据申请专利范围第21项之套组,其包含超过一 对根据申请专利范围第1项之寡核酸引子。 23.根据申请专利范围第21项之套组,其包含至少至 少一根据申请专利范围第5项之合成性核酸序列 , 其条件为,当包含序列SEQ ID NO:8之第二引子不用于 增幅时,则该核酸序列应不包含任何序列SEQ ID Nos:12-15;当包含序列SEQ ID NO:5之第一引子不用于增 幅时,则该核酸序列应不包含任何序列SEQ ID Nos:9 -11。 24.一种侦测及监别检体中肠病毒71型的套组,其包 含: 至少一对根据申请专利范围第1项之寡核酸引子 ,条件为第二引子系包含序列SEQ ID NO:8;及 至少一个包含序列SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:13之合成性 核酸序列。 25.一种侦测及监别检体中克沙奇病毒A16型的套组, 其包含: 至少一对根据申请专利范围第1项之寡核酸引子 ,条件为第二引子系包含序列SEQ ID NO:8;及 至少一个包含序列SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:15之合成性 核酸序列。 26.一种侦测及监别检体中肠病毒71型及克沙奇病 毒A16型的方法,其包含: 至少一对根据申请专利范围第1项之寡核酸引子 ,条件为第二引子系包含序列SEQ ID NO:8; 至少一个包含序列SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:13之合成性 核酸序列以及至少一个包含序列SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:15之合成性核酸序列。 27.一种侦测及监别检体中肠病毒71型或克沙奇病 毒A16型的方法,其包含: 至少一对根据申请专利范围第1项之寡核酸引子 ,条件为第二引子系包含序列SEQ ID NO:8; 至少一个包含序列SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:13之合成性 核酸序列以及至少一个包含序列SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:15之合成性核酸序列。 图式简单说明: 图1之示意图显示相关于肠病毒71型之一部份cDNA序 列,其中具有编号U22521之cDNA序列系得自GenBank资料 库。在框中的序列相关于本发明之引子及探针,其 分别以发明人所使用的命名予以标示。 图2为以不同引子之组合,利用聚合链反应增幅 肠病毒71型核酸之电泳分析图。a至h行各使用之引 子对为:a:f1/r1,b:f2/r1,c:f3/rl,d:f5/r1,e:f1/r2,f:f2/r2,g:f3/r 2,h:f5/r2。m为核酸大小标记,1至5分别为:1:700bp,2:600 bp,3:500bp,4:400bp,5:300bp。 图3为肠病毒71型及克沙奇病毒A16型之核酸经聚合 链反应放大后与肠病毒共通型探针(p1,p2,p3)杂交 之结果。聚合链反应使用之引子配对为f5/rl,固 定在尼龙膜探针之分部位置如下:左边第一排之第 2至4点:p1,中间排之第2至4点:p2,右边第一排之第2至 4点:p3;1和2:肠病毒71型与克沙奇病毒A16型核酸;3:为 不含核酸之控制组。 图4为肠病毒71型,克沙奇病毒A16型及肠道细胞病变 孤独病毒第3型之核酸分别经多样化聚合链反应 (multiplex PCR)增幅后,与肠病毒共通型探针(p1,p2,p3) 及肠病毒71型,克沙奇病毒A16型专一性探针(71-2,71-3 ,16-1,16-2)杂交之结果。聚合链反应使用之引子 配对为f5/rl及f7/r4,固定在尼龙膜探针之分布位置 如下:将此6x6点阵十字等分为4个3x3的等分,其中左 上方区块属肠病毒共通型探针区块,每一排各为3 个探针之3重复,右上区块为肠病毒71型区,由两个 专一性探针交错排列,左下区块为克沙奇病毒A16型 区,由两个专一性探针交错排列。 |
