改良的细胞内活性氧检测方法

摘要

一种改良的细胞内活性氧检测方法。培养细胞长满单层后，置于37℃、50mL/LCO₂/950mL/L空气的培养箱，24h后加入不同浓度的刺激物，继续孵育1小时；去掉刺激物，加入DCFH－DA，加入的DCFH－DA浓度应根据实际观察到细胞浓度进行调整；去掉DCFH－DA，用PBS洗涤2次，检测细胞荧光强度。本发明的特点是加入的DCFH－DA浓度根据实际观察到细胞浓度进行调整。

主权项

1、一种改良的细胞内活性氧检测方法。其特征在于，该方法按下列步骤顺序进行：(1)培养细胞长满单层后，用胰蛋白酶消化并混悬于含100mL/L FCS的DMEM培养液中，调整细胞数为2×107/L，以每孔100μL加入96孔培养板中。(2)置于37℃、50mL/L CO2/950mL/L空气的培养箱，24h后加入不同浓度的刺激物，并设对照组加入等量DMEM，继续孵育1小时。(3)去掉刺激物，加入DCFH-DA，注意：加入的DCFH-DA浓度应根据实际观察到细胞浓度进行调整。(4)去掉DCFH-DA，用PBS洗涤2次，检测细胞荧光强度。激发波长488nm，发射波长530nm。